Estudio de la proteína transportadora de ceramida en parásitos

M. LANDONI ; V.G. DUSCHAK; A. S. COUTO

Mar del Plata

Simposio; XX Simposio NAcional de Quimica Organica; 2015

Sociedad Argentina de Quimica organica

Existen datos que sugieren que los SL juegan un rol importante en múltiples aspectos de la vida celular incluyendo diferenciación, replicación, tráfico, y síntesis de factores virulentos. Sin embargo, el conocimiento de la estructura y la función de los esfingolípidos (SL) en protozoarios patógenos continua siendo escaso. En nuestro laboratorio hace ya algunos años se está trabajando en la determinación estructural de SL de Trypanosoma cruzi y Plasmodium falciparum así como en la identificación y caracterización de las enzimas involucradas en su metabolismo con el fin de definir las bases moleculares con que los SL contribuyen en la infección y de determinar blancos para nuevas drogas antiparasitarias. Las enzimas del metabolismo de los esfingolípidos se encuentran íntimamente relacionadas unas con otras generando una red interconectada que regula no solo los niveles de los lípidos bioactivos individuales, sino también sus interconexiones metabólicas. En las células de mamífero, la mayoría de los productos han sido muy estudiados y las enzimas involucradas han sido bien caracterizadas, sin embargo, en protozoarios parásitos, es un área prácticamente desconocida.El objetivo del presente trabajo es determinar la presencia de la enzima transportadora de la ceramida (CERT) desde el retículo endoplásmico donde es la ceramida es sintetizada hasta el Golgi donde es posteriormente transformada en los diferentes metabolitos. En mamíferos esta enzima se encuentra bien caracterizada y se conoce que la misma tiene múltiples sitios de fosforilación. Por análisis en SDS-PAGE de un lisado de epimastigotes de T. cruzi y de formas intraeritrocíticas de P. falciparum seguido de blotting y revelado con anticuerpo anti-CERT humano comercial, fue posible determinar la presencia de una proteína reconocida por el anticuerpo de PM aparente 56-58 kDa indicando la posible existencia de este tipo de proteínas transportadoras. Posteriormente, se comenzó con la purificación parcial de la proteína en T. cruzi. Se realizó una precipitación con CaCl2 de la fracción lisosomal de parásitos obteniéndose una fracción enriquecida en proteínas fosforiladas que se evidenciaron por SDS-PAGE seguida de una tinción con quercetina específica para fosfoproteínas. El revelado con el anticuerpo específico mostró que dicha fracción contiene la proteína reconocida por el anticuerpo. Por otra parte, el reconocimiento de la proteína con el anticuerpo específico fue determinado con y sin tratamiento con fosfatasa alcalina.Estos resultados indican la presencia de una proteína transportadora de ceramida en formas epimastigote de Trypanosoma cruzi con características estructurales similares a las de mamíferos que no había sido descripta hasta el momento. La caracterización por espectrometría de masa de las proteínas de la fracción parcialmente purificada se encuentra en desarrollo.