Caracterización del exopolisacárido de PSEUDOMONAS VERONII 2E.

G. CAVALLERO; A. C. CASABUONO; M.FERREIRA,; D. VULLO; A. S. COUTO.

Mar del Plata

Simposio; XX Simposio NAcional de Quimica Organica; 2015

Sociedad Argentina de Quimica organica

Los tratamientos biológicos son una novedosa tecnología utilizable para aguas con contaminantes de metales pesados. Dado que los microorganismos han desarrollado estrategias de supervivencia en ambientes con gran polución, los mecanismos detoxificantes como bioacumulación, biotransformación, biomineralización desarrollados pueden ser aplicados in situ o ex situ para diseñar procesos de biorremediación económicos. Pseudomonas veronii 2E es una bacteria aislada del contaminado rio Reconquista (en el área metropolitana de Buenos Aires)1 y fue seleccionada para ser estudiada debido a i- su gran tolerancia al cadmio y sus altos rendimientos en biomasa ii- altos rendimientos de biosorción a pH controlados (7.5) y iii- la habilidad de desarrollar films en superficies inertes que permiten la utilización de reactores fijos o de capas fluidas. Esta bacteria libera al medio sustancias poliméricas extracelulares las cuales fueron aisladas por centrifugación del medio de cultivo y precipitación con etanol en frío. De este precipitado por tratamiento con desoxicolato de sodio se separó un lipopolisacárido de una fracción polisacarídica. Esta última fue analizada en columna de DEAE-Sepharose? utilizando como eluyente distintas concentraciones salinas del buffer Tris-HCl 0.02 M - Urea 7 M, pH 6.8 y se obtuvieron cuatro fracciones de exopolisacárido (A, B, C, y D) eluídas con 0, 0.2, 0.4 y 0.6 M de NaCl respectivamente. Se realizó la cuantificación por fenol-sulfúrico evidenciando la fracción B como compuesto mayoritario.Cada uno de los polisacáridos obtenidos fue hidrolizado con TFA 2N, 4hs a 100ºC y los productos de hidrólisis se analizaron por HPAEC-PAD. Se determinó la presencia de fucosa, glucosamina, galactosa, glucosa y manosa como componentes neutros en relaciones variables. Cuando el análisis se realizó en condiciones de separación de azúcares acídicos se observó la presencia de un componente que podría corresponder a un monosacárido sustituído. Por lo tanto, cada una de los polisacáridos se hidrolizó con ácido oxálico 50mM durante 90 min a 100ºC a fin de remover acido pirúvico como posible sustituyente. El análisis de los monosacáridos neutros de las distintas fracciones depiruviladas mostró un aumento en la concentración de manosa evidenciado la presencia de manosa piruvilada en las fracciones acídicas. El peso molecular de la fracción mayoritaria (B), se estimó mediante cromatografía de permeación en BioGel® P-100, siendo este mayor a 80 KDa.