Applied glycomics to parasites and bacteria.

ALICIA S. COUTO

Los Cocos

Simposio; II CAEM; 2014

Soc. Argentina de Q. Orgánica

UTILIZACION DE LA ESPECTROMETRÍA DE MASA UV-MALDI PARA LA DETERMINACIÓN ESTRUCTURAL DE GLICOCONJUGADOS Couto, Alicia S. CIHIDECAR, Departamento de Química Orgánica, Facultad de Cs Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Pabellón II, Cdad. Universitaria, 1428, Argentina. Email: acouto@qo.fcen.uba.ar En los últimos años nos hemos focalizado en el estudio estructural de glicoconjugados de diferentes microorganismos utilizando como herramienta principal la espectrometría de masa UV-MALDI (matrix assisted laser desorption ionization) con el fin de ayudar a la comprensión de diferentes procesos biológicos. Como primer ejemplo, se presentará el análisis de un lipopolisacárido (LPS) aislado de la cepa salvaje Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) y de una mutante1. Esta bacteria es causante de la cancrosis en los cítricos provocando la consecuente pérdida económica y el análisis resultó de utilidad para entender la función de los LPS en el proceso de patogénesis. En un segundo ejemplo describiremos una nueva aplicación que hemos desarrollado trabajando con glicoesfingolípidos aislados de Plasmodium falciparum. En este caso utilizando la denominada química "click" para unir en forma selectiva un grupo fluorescente a un azúcar modificado que es incorporado metabólicamente, se logra la marcación de dichos glicolípidos. La habilidad de marcar selectivamente con un grupo reportero fluorescente permite no solo la localización sino también la caracterización de los metabolitos por e.m. en un único experimento constituyendo un nuevo método para cuantificar cambios dinámicos. Finalmente, como tercer ejemplo se describirá el estudio estructural de la glicoproteína de capa-S (GP-S layer) de Haloferax volcanii, una Archaea aislada inicialmente del mar muerto. El estudio se realizó sobre la glicoproteína de la cepa salvaje y la de una mutante con deleción en un gen de una proteasa romboide que mostraba alteración en la glicosilación. En este caso, utilizando digestión con PNGasa F seguida de análisis por cromatografía de alta resolución de intercambio aniónico y e.m. MALDI-TOF, fue posible determinar la presencia de un oligosacárido novedoso unido en forma N-glicosídica a la proteína de estructura GlcNAc2Hex2-(SQ-Hex)6. Un estudio glicoproteómico permitió determinar que dicho oligosacárido se encuentra unido al sitio N732 de la proteína. Esta constituye la primera descripción de la presencia de un oligosacárido conteniendo unidades repetitivas de SQ-Hex en una glicoproteína. Cuando se realizó este estudio sobre la glicoproteína presente en la cepa mutante de H.volcanii ,se observó la presencia de un oligosacárido similar pero con menor número de unidades repetitivas. Referencias 1- A.Casabuono, S. Petrocelli, J. Ottado, E. G. Orellano and A. S. Couto. (2011) J. Biol. Chemistry 286, (29) 25628?25643 2- T. Piñero, V.J. Peres, A. Katzin, A.S. Couto. Mol Biochem Parasitol (2012) 182, 88-92 3- J. Parente, A. Casabuono, M. C. Ferrari, R.A. Paggi, R. E. De Castro, A. S. Couto and M. I. Gimenez. (2014) J. Biol. Chemistry 289,11304-11317.