Análisis por espectrometría de masa UV-MALDI-TOF de glicoesfingolípidos

MALENA LANDONI; VILMA DUSCHAK; ROSA ERRA-BALSELLS; ALICIA S. COUTO

Mar del Plata- Argentina

Congreso; XVI Congreso de la Soc. Argentina de Química Orgánica; 2007

ANÁLISIS POR ESPECTROMETRÍA DE MASA UV-MALDI-TOF  DE GLICOESFINGOLÍPIDOS. Malena Landoni1, Vilma Duschak2, Rosa Erra-Balsells1 and Alicia S. Couto1 1CIHIDECAR, Departamento de Química Orgánica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Bs As, 1428, Argentina. 2 Departamento de Investigación, Inst. Nac. de Parasitología ‘Dr Mario Fatala Chaben’, ANLIS-Malbrán, Ministerio de Salud, Bs As, Argentina. Email: mlandoni@qo.fcen.uba.ar La espectrometría de masa UV-MALDI-TOF se ha constituido en los últimos años, en una herramienta esencial para el análisis de glicoconjugados. Sin embargo, es conocido que la preparación de la muestra resulta de gran importancia para obtener resultados en los experimentos de e. m. UV-MALDI ya que variaciones en el tipo de matriz utlizada, en la forma del depósito realizado y en la cristalización de la muestra influyen directamente en la deserción ye ionización del analito. Aunque en los últimos años se ha avanzado mucho en los conocimientos acerca del proceso general de la espectrometría de masa UV-MALDI, todavía no esta claro, en muchos casos, porque algunas moléculas pueden actuar como matriz mientras que otras no (aparte del hecho de que la matriz debe absorber luz a la longitud de onda del láser), en otras palabras, no se sabe con certeza como optimizar o elegir la estructura química de la matriz para obtener mejores resultados en el análisis de muchos analitos complejos. Además, el análisis de pequeñas moléculas por espectrometría de masa MALDI está limitado debido a la gran cantidad de señales de la matriz que se observan en la región de masas bajas. Por otro lado, el uso de pequeñas moléculas como fluoróforos para marcaciones biológicas ha sido, seguramente, uno de los mayores avances en ese campo. Una de las ventajas más significativas del uso de fluoróforos ha sido su utilidad para visualizaciones directas en un microscopio de fluorescencia de los componentes marcados, así como también su fácil detección en geles de poliacrilamida y cromatografía en capa delgada usando scanners de fluorescencia. Asimismo, estos grupos fluorescentes son hidrofóbicos y pueden penetrar libremente las membranas celulares. En este trabajo reportamos una nueva posibilidad de análisis de esfingolípidos por espectrometría de masa UV-MALDI-TOF. En este caso se llevó a cabo el análisis de glicoesfingolípidos unidos covalentemente a un grupo fluorescente, el cual actúa no sólo como marcador sino también como matriz, permitiendo la desorción e ionización de los esfingolípidos. El interés de este trabajo es mostrar que no es necesario el agregado de un compuesto que actúe como matriz ya que el propio grupo fluorescente utilizado para la marcación metabólica de los lípidos es capaz de generar los iones radicales a través de reacciones de transferencia de protones intramoleculares a partir de un estado excitado permitiendo la obtención de espectros de gran calidad. La detección selectiva de las moléculas de analito brinda una oportunidad para simplificar la identificación de los mismos a partir de muestras biológicas y agrega un nuevo uso para este tipo de compuestos: como