Caracterización de los exopolisacáridos obtenidos de diferentes cepas mutantes de BRADYRHIZOBIUM JAPONICUM

A. C. CASABUONO; J. I. QUELAS; C. MOLINA AGOSTINI; A. LODEIRO; A. S. COUTO

Mar del plata

Simposio; XIX Simposio Nacional de química Orgánica; 2013

Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica

Un grupo de bacterias del suelo, conocidas colectivamente como rizobios, colonizan las plantas en nódulos en donde las bacterias son capaces de fijar N2 atmosférico. Este delicado proceso requiere que las plantas susceptibles de infección no reconozcan a los rizobios como patógenos y minimicen sus respuestas de defensa. El exopolisacárido (EPS) de Bradyrhizobium japonicum es importante para la infección y nodulación en la soja con el consecuente interés agronómico. En la cepa B. japonicum USDA 110, el EPS consiste de un polímero de unidades pentaméricas repetidas de galactosa, glucosa, ácido galacturónico y manosa. Un mutante (llamado P22) fue caracterizado como incapaz de sintetizar UDP-galactosa, su EPS carece de galactosa, sin embargo la nodulación no se afecta (Quelas et al. 2006). Para comprender mejor el rol del EPS en este proceso, se construyeron mutantes en B japonicum USDA 110 y se estudiaron las estructuras de los respectivos EPS. En este trabajo se aislaron los EPS de tres mutantes diferentes de B. japonicum: m1= exoB que estaría afectando una 4-epimerasa; m2= exoT que afectaría una hexosil transferasa y m3= una doble mutante exoB-exoT. y se compararon con el EPS obtenido de la cepa salvaje. Los EPS fueron purificados y una fracción de cada uno de ellos, se sometió a hidrólisis ácida total. La cuantificación de azúcares neutros por HPAEC-PAD mostró que la relación de azúcares resultó afectada: mientras el EPS-m1 no contenía de galactosa, EPS-m2 aumentó la proporción de galactosa y glucosa con respecto a la cepa salvaje. Por otra parte EPS-m3 mostró mayor cantidad de glucosa y una marcada disminución de galactosa. La determinación de azúcares ácídicos mostró que EPS-m1 no tenía afectada la síntesis de ácido galacturónico mientras que en EPS-m2 y EPS-m3 ésta disminuyó. Además como productos de hidrólisis parcial EPS-m2y EPS-m3 mostraron un componente de mayor tr que fue analizado por espectrometría de masa MALDI-TOF en modo positivo y negativo. En dicho análisis se observó la presencia de un oligosacárido formado por dos unidades de ac.hexurónico y hexosa metilada.