Tratamiento Fotodinámico de células de linfoma cutáneo T utilizando derivados del ácido 5-aminolevúlico

VALLECORSA P, CALVO G, DI VENOSA G, SAENZ D, GOLA G, RAMIREZ J, BATLLE A, CASAS A.

Jornada; XXXII Jornadas de Oncología Inmunooncología: Avances diagnósticos y terapéuticos"; 2017

iNSTITUTO ROFFO

Se evaluó la terapia fotodinámica (TFD), empleando el ácido5 aminolevúlico (ALA) y sus derivados esterificados en las líneas de LinfomaCutáneo de Células T (LCCT). El objetivo deseado es de encontrar un potencialpro-fotosensibilizante para tratar esta patología, la cual gracias a suscaracterísticas fisioanatómicas resulta un blanco potencial de la TFD. ?LÍNEASCELULARES Y CULTIVO CELULAR. Myla  yHut78, ambas lineas de LCCT, se cultivan y mantienen en medio RPMI-1640,L-glutamina 2 mM, gentamicina 40 ug/ml y SFB 10%, a 37ºC en una atmósfera CO25%. ?ENSAYO DEVIABILIDAD DE MTT. La relación fototoxicidad fue determinada mediante el ensayode MTT (3-(4,5- dimetil tiazol-2-yl)-2,5- difeniltetrazoliobromuro). Luego delos tratamientos, se agregó en cada pocillo, 0,5 mg/mL de MTT y se incubaron a37º C por 1 h. Como resultado se obtuvieron cristales de formazán, sedisolvieron en DMSO y se leyó la absorbancia obtenida a 560 nm en un lector deplacas (SpectraCount Packard). ?TRATAMIENTODE TFD. Las células se incubaron en medio sin suero conteniendo ALA o derivadosy luego fueron irradiadas. A continuación, se reemplaza por medio fresco y seincubaron otras 19 h para permitir que ocurra el fotodaño, y se midió laviabilidad. Se define la dosis letal 50 (DL50) como la dosis de luz que produceel 50% de muerte celular.?TRATAMIENTOLUMÍNICO. Se usaron dos tubos fluorescentes que producen un espectro de luzentre 400 y 700 nm, con máximo en 600 nm. Las placas se ubicaron a 20 cm de lafuente lumínica. Se utilizaron potencias entre 10 y 150  mJ/cm2 y la densidad de poder fue de 0,5mW/cm2. ?EXTRACCIÓNDE PORFIRINAS DE LAS CÉLULAS. Las células se incubaron con diferentesconcentraciones de ALA o sus derivados en medio sin suero. Para extraer lasporfirinas acumuladas en las células, se agregó 1 ml de HCl 5% y se dejó a 37ºC media hora. Las porfirinas liberadas al medio, se cuantificaron por elagregado directo de 2 ml de HCl 5%. Estas condiciones resultaron ser óptimaspara una extracción completa de porfirinas. Las mediciones se realizaron en unespectrofluorómetroShimadzu RF 510, utilizando el par excitación/emisión406/604 nm, y empleando PpIX como estándar de referencia. La cantidades de porfirinas sintetizadas (ng de PPIX/105cél) fue de 4 a 5 para ALA, me- y He-ALA, mientras que para 88- fue de 3.25 a4.25, y para 89-, 91-, y 95-ALA de entre 2 a 3. Para la TFD se utilizaronconcentraciones bajas o plateau para las drogas más eficientes (0.25mM) por loque las DL50 obtenidas fueron de 0.12 para He-ALA, 0.16, 0.18, 0.24 y 0.23 para88-, 89-, 91-, y 95-ALA respectivamente, mientras que ALA y me-ALA no generaronfotodaño. Se evaluó la TFD mediada por ALA y derivados en líneas deLinfoma Cutáneo de Células T, Myla (MF) y Hut78 (S. Sésary). La ALA-TFD mostrósíntesis de porfirinas y eficiencias similares a las observadas en líneas detumores sólidos como lo es la línea LM3 de adenocarcinoma mamario. De losderivados de ALA clásicos, el Hexil ALA demostró ser altamente más eficienteque ALA y Metil ALA. También se evaluaron cuatro nuevos derivados de ALA(88ALA, 89ALA, 91ALA y 95ALA), los que demostraron ser muy buenospro-fotosensibilizantes, tan buenos como el Hexil ALA. Este tipo de estudiosdemuestra el potencial de la TFD en la patología, y el screening de nuevospro-fotosensibilizantes en busca de la mejora de la terapia fotodinámica.