Efecto de la fotoinactivación sobre Staphylococcus aureus empleando fotosensiblizantes de origen vegetal

GÁNDARA L; MAMONE L; DOTO C.; RODRIGUEZ L; DI VENOSA G; CANCELADA L.; BUZZOLA F; CASAS A

Buenos Aires

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas - SADEBAC 2012; 2012

Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas

La creciente emergencia de resistencia antibiótica entre los aislamientos de Staphylococcus aureus ha llevado a la búsqueda de terapias antimicrobianas alternativas para las cuales la bacteria no será capaz de desarrollar resistencia fácilmente. La terapia fotodinámica al combinar la acción de un fotosensibilizante no tóxico y la luz visible ofrece una alternativa al control de las infecciones estafilocóccicas. S. aureus puede causar infecciones desde leves, progresivas persistentes, hasta agudas severas. La fotoinactivación bacteriana se ha empleado especialmente en la erradicación de biopelículas presentes en placas dentales, implantes orales y prótesis, y se ha propuesto su uso en catéteres colonizados. Por otra parte, se ha demostrado que los fotosensibilizantes catiónicos son especialmente eficientes en la erradicación de biopelículas tanto de S. aureus como de S. epidermidis. En un “screening” llevado a cabo en nuestro laboratorio, a partir de 100 muestras de plantas autóctonas en la búsqueda de nuevos fotosensibilizantes, se han identificado varias especies vegetales capaces de inactivar bacterias Gram positivas. El objetivo de este trabajo fue el de evaluar la capacidad de fotoinactivar S. aureus cepa Newman, empleando extractos de flor, hoja y raíz de especies vegetales previamente clasificadas como potenciales fotosensibilizantes. Se empleó además el fotosensibilizante sintético azul de Toluidina. Como fuente de luz se usó un arreglo de dos tubos fluorescentes con un espectro de luz entre 350 y 800 nm, mediante el cual se iluminaron placas de 24 pocillos conteniendo la suspensión bacteriana en presencia del fotosensibilizante. Inmediatamente luego de la iluminación, se hicieron diluciones seriales y el número de bacterias viables se determinó luego de plaqueo en placas de agar tripteína de soya. La fotoinactivación de S. aureus con extracto de flor de Solanum verbascifoliium (0,5 mg/ml) indujo una disminución de 6 órdenes de magnitud, al igual que la raíz de Cissus verticillata (0,5 mg/ml); la hoja de Combretum fruticosum (0,5 mg/ml) 1 orden de magnitud, y la hoja de Scutia buxifolia (0,01mg/ml) 2 órdenes de magnitud. Los inóculos tratados con el fotosensibilizante sintético azul de Toluidina (5 µM) indujeron una disminución de 7 órdenes de magnitud en las UFC/ml. Los datos de reducción en las UFC fueron los siguientes (media ± SD): Control:  1,3x108 ± 8,7x107 UFC/ml vs  Cissus verticillata 0,5 mg/ml: 7,7x102 ± 9,2x102; Solanum verbascifollium 0,5 mg/ml: 1,9 x102 ± 2,1x102; Combretum fruticosum 0,005 mg/ml:  4,3x107 ± 5,4 107; Scutia buxifolia 0,01 mg/ml: 7,7x106 ± 1,0x107 y azul de toluidina 5 µM:  9,08x101 ± 2,01x102 (p< 0,01, Mann-Whitney test). La conclusión más saliente de este trabajo es que el patógeno S. aureus es susceptible de ser fotoinactivado tanto con fotosensibilizantes naturales como sintéticos. Estos resultados revisten importancia en la aplicación del tratamiento fotodinámico en cepas de S. aureus resistentes a meticilina, especialmente en sitios donde se pueda acceder con la luz láser acoplada a una fibra óptica. En el futuro llevaremos a cabo estudios de fotoinactivación de biopelículas de este patógeno.