Aislamiento, identificación y evaluación del efecto de diferentes lioprotectores en levadura aisladas del aparato digestivo de Rhamdia quelen

MARCOS GABRIEL GUIDOLI; SILVIA IRENE BOEHRINGER; DAVID ROQUE HERNÁNDEZ; HUGO ALBERTO DOMITROVIC; MARÍA ELENA NADER MACÍAS; SEBASTIÁN SÁNCHEZ

Camboriú

Workshop; IV Workshop sobre o Jundia; 2011

Diferentes géneros de levaduras han sido aprobados para su uso como probióticos en animales, y la posibilidad de aislarlos de la microbiota indígena de peces podría facilitar su posterior colonización en base a su especificidad de especie. La liofilización es un método de conservación de microorganismos empleada frecuentemente en diversas áreas. El proceso produce diferentes tipos de daños en las células disminuyendo su viabilidad. Las condiciones de liofilización deben adecuarse para cada microorganismo ya que no todos responden de manera similar a este método. El objetivo de este trabajo fue aislar, identificar fenotípicamente y evaluar las condiciones óptimas de liofilización y almacenamiento de levaduras del tracto digestivo de ejemplares silvestres de Rhamdia quelen a fin de avanzar en el diseño de un producto seco de potencial aplicación probiótica, capaz de conservar sus características durante el almacenamiento. Se trabajó con 25 ejemplares de diferentes localidades de la provincia de Corrientes a los cuales, luego de 24 h de ayuno, se extrajo el tubo digestivo y se lavó la mucosa intestinal en condiciones de esterilidad con solución salina. El líquido obtenido se centrifugó a 3.500 rpm y el sobrenadante se cultivó en agar Sabouraud modificado por Emmons (24 h a 37 °C). La identificación fenotípica parcial de las levaduras aisladas se realizó por cultivos en Chrom Agar (48 h a 37 °C), y observación de la micromorfología en agar arroz (72 h a 25 °C). Se aislaron cuatro cepas de levaduras que se identificaron parcialmente por crecimiento de colonias azules en el medio Chrom Agar y por la observación y distribución de blastosporas a lo largo del seudomicelio como Candida tropicalis. Para la liofilización, una de las cepas se cultivó en caldo maltosado (18 h a 37 ºC) y las células obtenidas fueron cosechadas, lavadas, concentradas y resuspendidas en diferentes soluciones lioprotectoras estériles: A- Sacarosa (5%) B- Leche descremada (20%) y C- Agua destilada (control). Las suspensiones de microorganismos fueron congeladas primero en freezer (12 h a -20 °C) y luego en nitrógeno líquido (5’) para su posterior liofilización. Se cuantificó el número de células viables antes e inmediatamente después del proceso de secado y posteriormente cada 30 días, durante tres meses de almacenamiento a temperatura ambiente y a 4 °C a resguardo de la luz. Los resultados obtenidos indican que el número de microorganismos viables disminuye entre 1 (A) y 4 (C) unidades logarítmicas durante la liofilización. Luego de un mes de almacenamiento el número de microorganismos viables a temperatura ambiente fue nulo en todos los casos. En refrigeración también fue negativo en el control, mientras que en A y B las disminuciones fueron de una unidad logarítmica. Al segundo mes, los valores disminuyeron una unidad logarítmica en A y dos en B. Hacia el tercer mes, solo se detectaron microorganismos viables en A con una disminución de tres unidades logarítmicas. El análisis estadístico indica diferencias significativas entre las pendientes de regresión de las tres suspensiones. Los resultados obtenidos permiten concluir que sacarosa al 5% es el mejor de los lioprotectores ensayados para C. tropicalis y es el que permite conservar la viabilidad de las levaduras por períodos más prolongados a temperaturas de refrigeración.