Purificación de RNP nuclear para su aplicación clínica y diagnostica en un modelo experimental autoinmune

VALDEZ, J.C.; LEBLANC, J.G.; AJMAT, C.; ABBAS, L.; FIAD, L.; LORENTE, C.; VALVERDE, M.; HARO, M.I.

Tafí del Valle, Tucumán

Jornada; XXII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2005

Asociación de Biología de Tucumán

La enfermedad mixta del tejido conectivo (EMTC) fue propuesta hace tiempo como una entidad clínica definida que presenta anticuerpos contra un antígeno extraíble del núcleo, el cual se identificó como una ribonucleoproteína pequeña (U1 snRNP). Con el propósito de obtener un modelo experimental de EMTC mediante la inoculación de RNP a ratones y para su utilización en la determinación de los anticuerpos anti-RNP desarrollados en el modelo, se realizó la purificación de esta proteína. Material y métodos. Purificación de RNP: se realizó el método de Blobel y Potter para la obtención del núcleo de hígado de rata, del cual se separa la proteína por ultracentrifugación y fraccionamiento en sulfato de amonio (30% y 60%). La verificación de la pureza de la proteína se realizó por electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS PAGE). Se determinó la cantidad obtenida por método de Bradford (Bio Rad) a 595 nm. Desarrollo de ELISA: se utilizó la proteína RNP obtenida previamente como antígeno que se pega a una placa multipozo en una concentración de 1ug/100 ul/pocillo, dejando a temperatura ambiente toda la noche en PBS/0.005% Tween20/ 1% ovoalbúmina. Se utilizó como control positivo suero de pacientes con EMTC y como control negativo suero de ratones no tratados con RNP (grupo control). Resultado: se obtuvo un valor promedio de proteína = 0.161 mg/ml (D Std 0.027) que en la electroforesis (SDS PAGE) mostró un patrón similar a la fracción conocida como U1 snRNP. Podríamos concluir de acuerdo a estos resultados que hemos purificado la proteína RNP que en la literatura se encuentra relacionada con EMTC. Para validar la especificidad en la inducción de anticuerpos en el modelo experimental de EMTC consideramos necesaria la comparación por métodos de ELISA y Western blot de los resultados obtenidos en sueros de pacientes y de ratones tratados con RNP.