INVESTIGADORES
MICHAUT Marcela Alejandra
congresos y reuniones científicas
Título:
ANÁLISIS DE LA REACCIÓN CORTICAL DE OVOCITOS DE RATÓN EN TIEMPO REAL
Autor/es:
CAPPA, ANDREA I.; DE BLAS, GERARDO A; DE PAOLA, M. MATILDE; MAYORGA, LUIS S.; MICHAUT, MARCELA A.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; 2do Congreso Internacional de la Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias
Resumen:
La
fecundación de un ovocito por un espermatozoide desencadena su activación para
iniciar el desarrollo embrionario. Uno de los primeros signos de la activación
ovocitaria es la exocitosis de los gránulos corticales, proceso conocido como
reacción cortical, imprescindible para evitar la poliespermia. El objetivo de
este trabajo fue estudiar la dinámica de la reacción cortical en tiempo real en
ovocitos de ratón CF-1 activados partenogenéticamente y comparar la cinética
entre ovocitos ovulados (madurados in vivo) y ovocitos madurados in vitro. Para observar la reacción
cortical se utilizó la lectina Lens
culinaris conjugada con FITC (LCA-FITC) para teñir el contenido de los
gránulos corticales secretado al espacio perivitelino. Los ovocitos ovulados
fueron obtenidos a partir de oviductos provenientes de hembras estimuladas
hormonalmente con PMSG y hCG. Para la
maduración in vitro, los ovocitos
fueron colectados en medio MEM/milrinone
a partir de ovarios de hembras estimuladas con PMSG y luego madurados in vitro en medio CZB (medio para madurar
ovocitos de ratón) o GIVF (medio para madurar ovocitos humanos) durante 17hs,
en presencia o ausencia de células del cúmulo. Sólo los ovocitos con corpúsculo polar fueron seleccionados en
todos los grupos. Los ovocitos de cada condición fueron montados en una cámara
conteniendo medio M2 libre de calcio y magnesio y activados
partenogenéticamente con cloruro de estroncio 30 mM en presencia de la lectina
LCA-FITC. Los ovocitos madurados in vivo
e in vitro fueron estimulados el
mismo día para obtener resultados comparables. Las imágenes fueron capturadas
en un microscopio invertido acoplado con un sistema de iluminación LED y una
cámara de alta resolución espacial y temporal. Se tomaron imágenes cada 1 min durante
1 h y, finalmente, las células fueron fijadas, permeabilizadas y teñidas con la
lectina Lens culinaris conjugada con
Rodamina para cuantificar los gránulos corticales por microscopía confocal. Los
resultados mostraron que el 100 % (42/42)
de los ovocitos ovulados reaccionaron
entre 10-15 min de recibir el estímulo; por el contrario, los ovocitos
madurados in vitro (0/39) no
reaccionaron en las condiciones analizadas. En concordancia con estos
resultados, la cuantificación de los gránulos corticales mostró que sólo los
ovocitos ovulados tuvieron una disminución significativa de los gránulos
corticales comparados con el grupo control. Nuestros resultados muestran la
dinámica de la reacción cortical en tiempo real y revelan que si bien la
maduración in vitro no afecta las
características morfológicas del ovocito, altera su competencia de exocitar los
gránulos corticales.