Caracterización de la enzima málica NADP-dependiente de Nicotiana tabacum

LARA, MARIA V.; MÜLLER, GABRIELA L.; DRINCOVICH, MARÍA F.; ANDREO, CARLOS S.

Santa Rosa

Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

El principal objetivo de este estudio es caracterizar las distintas isoformas de laenzima málica NADP (EM-NADP) en Nicotiana tabacum,u na especieC 3.La EM.NADP cataliza la decarboxilación oxidativa del L.malato produciendo piruvato, CO2 y NADPH. En plantas superiores, isoformas citosólicas y plastídicas h an sido detectadasr, eflejando  la variedadd e funcionesq ue desempeñean el metabolismo de la planta (Drincovich et al., 2001). La forma más estudiada en plantas es la enzima decarboxilante primaria en la fotosíntesisC 4 (Rothermel& Nelson, 1989) que participa en un mecanismoc oncentradodr e carbono. Se ha detectadoe n tabaco y apio una enzima málica asociada a las vainasvasculares en tallos y pecíolos de estas plantas C3, hipotetizándose sobre lapresenciad e un ciclo tipo C4 del cual pudo haberse originado el ciclo operante enplantas C4 (Hibberd & Quick, 2002). En el presente trabajo se encontró actividad EM-NADP en hoja, raíz y tallo de tabaco. Valores de 1,06; 0,65 y 0,81 U/mg de proteína fueron medidos a pH 7.8 en extractos crudos de los tejidos mencionados. Geles nativos revelados por actividad EM-NADP indicaron que en todos estos tejidos la enzima migra en forma más retardada con respecto a la EM-NADP fotosintéticap resentee n hojas de maíz. La menor movilidad fue obtenida para la isoforma presente en raíces de tabaco que se comporta igual a la isoforma de raíces demaíz. La EM-NADP presente en tallos y hojas de tabaco presentó una movilidadintermedia. Estos geles fueron electrotransferidos a membranas de nitrocelulosa e incubados con anticuerpos obtenidos contra las EM-NADP de 62 y 66 11kDa presentes en hojas y raíces de maíz respectivamente(S aigo et al., 2004). En ambos casos, las bandas de actividad visuailz adas en los diferentes tejidos de tabaco reaccionaron con los anticuerpos usados, conflrtnando la identidad de enzimamálicad e la actividadp reviamentem edida. Las bandas con actividad EM-NADP presentese n tallos y hojas de tabaco fueron escindidasy corridas en un SDS-PA GE y reveladas por Western 810t utilizando anticuerpos contra la EM-NADP de raíces de maíz. En ambos tejidos de tabaco se observóu na sola banda inrnunoreactivad e aproximadament6e6 kDa. Isoelectroenfoques realizados en condiciones nativas y revelados por actividad mostraron la presencia de dos isoformas en cada uno de los tres tejidos detabaco analizados, siendo los puntos isoeléctricosd e 5,65 y 6,95 para hoja; de 5,15 y 6,95 para raíz y de 5,61 y 7,0 para tallo.En conclusión, se han encontrado varias isofonnas de la EM-NADP en diferentes tejidos de tabaco las cuales presentanm ayors imilitud con isoformasn o fotosintéticas descriptas para otras plantas (Drincovich et al., 2001). En la actualidad se está intentando clonar los ADNc que codifican para dichas isofonnas.Biblio2fafiaDrincovich, M.F., et al. 2001. FEBS Lett: 490: 1-6.Hibberd, M.H. & Quick, P. 2002. Nature 415:451-454.Rotherrnel,B .A. & Nelson, T. 1989. J Biol Chern 264:19587-19592.Saigo M.S., et al., 2004. Plant Mol Biol. In Press