CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Las adenilato quinasas son fosfotransferasas que catalizan la transferencia de fosfatos de alta energía entre los nucleótidos de adenosina manteniendo la homeostasis intracelular de los mismos y duplicando el potencial energético del ATP. Usualmente a estas enzimas se las encuentra asociadas a estructuras subcelulares dedicadas tanto a la síntesis como al consumo de ATP. Entre estas últimas podemos destacar a los flagelos, de cuya movilidad depende la supervivencia y viabilidad de numerosos organismos tanto de vida libre como parásitos incluyendo a Trypanosoma cruzi. Los flagelos eucariotas logran el movimiento mediante la acción altamente coordinada y regulada de dineinas. Estos motores moleculares sufren una fuerte inhibición por el ADP formado en la hidrólisis del ATP. La presencia de una adenilato quinasa en el flagelo no solo constituiría una fuente de energía de rápida obtención permitiendo el consumo del segundo enlace de alta energía del ATP, sino que además mantendrían baja la concentración del ADP inhibidor, asegurando de esta manera la continuidad en el movimiento flagelar. En este trabajo, mediante la expresión de proteínas de fusión en epimastigotes, determinamos la localización flagelar de la isoforma de adenilato quinasa TzAdK4. Se produjeron anticuerpos policlonales los cuales, en microscopias de fluorescencia, aportaron nuevos datos sobre la localización flagelar de TzAdK4. Estos resultados fueron corroborados mediante el análisis por Western Blot de diferentes extracciones sucesivas hasta llegar a flagelos crudos. Por último, se expresó en epimastigotes proteínas que poseían la extensión N-terminal inusual que presenta esta variante (55 aa) fusionada a GFP. Mediante este abordaje se pudo demostrar que este dominio N-terminal es el responsable de la asociación de TzAdK4 al flagelo. Esto trabajo constituye la primera identificación de una señal de localización flagelar en Trypanosoma cruzi.

enviar mensaje