Evaluación de compuestos polifenólicos como posibles inhibidores de la arginina quinasa de Trypanosoma cruzi: desde el docking molecular hasta su actividad tripanocida

VALERA, EDWARD; MIRANDA, MARIANA; REIGADA, CHANTAL; SAYE, MELISA; PEREIRA, CA

CABA

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología

La arginina quinasa (AK) es una enzima de gran importancia en el equilibrio energético de Trypanosoma cruzi, así como en la resistencia a distintos tipos de estrés. Por su ausencia en el hospedador mamífero, la AK es un buen blanco quimioterapéutico. Se han reportado pocos inhibidores de esta enzima, en su mayoría pertenecientes al grupo de los polifenoles. Por esta razón se decidió probar en un modelo in silico la unión de diferentes polifenoles hidroxilados al sitio activo de la AK y evaluar el efecto sobre la actividad enzimática y la viabilidad de los parásitos. Las estructuras 3D de los ligandos se obtuvieron de la base de datos de compuestos comerciales ZINC, a las cuales se les minimizó la energía en el servidor PRODRG2. La estructura cristalina de la AK de T. cruzi se obtuvo del RCSB PDB y se completaron los residuos faltantes con la AK de Limulus poliphemus. Usando el programa AutoDock Tools se ensayaron los diferentes compuestos, fijándose como flexibles los residuos de la AK Ser63, Gly64, Ile65, Tyr68, His315, Glu225, Glu314, Cys271, que han sido reportados como esenciales en la unión o catálisis de la arginina. Los grupos con menor energía se tomaron como formas representativas de la unión de los ligandos. Se compararon las energías libres de unión (∆G) mínimas de cada complejo enzima-ligando usando como control positivo el complejo AK-arginina. De los ligandos probados, 6 tuvieron un ∆G menor a la del control (-8,11) entre los que figura el resveratrol (-8,33), el cual estaría interactuando con el bolsillo hidrofóbico del sitio activo. Para los ensayos in vitro, inicialmente se eligió el resveratrol y se determinó que inhibe el 60% de la actividad enzimática a una concentración de 100 µM. La IC50 calculada en epimastigotes de T. cruzi fue de 13 µM al día 5 de cultivo. Este constituye el primer trabajo donde se identifica in silico un inhibidor de la arginina quinasa que no sólo actúa sobre la enzima sino que además posee efecto tripanocida.