Las adenilato quinasas de Trypanosoma cruzi

BOUVIER, LEON; MIRANDA, MARIANA; CANEPA, GASPAR; PEREIRA, CA

Buenos Aires

Congreso; II Jornadas Científicas, Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari; 2003

En el presente trabajo se ha identificado por primera vez la actividad adenilato quinasa en el parásito Trypanosoma cruzi. Esta enzima es responsable de la resíntesis rápida de ATP a partir de ADP duplicando de esta manera su potencial energético. Se determinaron los parámetros cinéticos en la fracción soluble de extractos de epimastigotes, donde se concentra la mayor parte de dicha actividad. Utilizando secuencias obtenidas en bancos de datos y una metodología basada en PCR y rastreo en bibliotecas genómicas se pudieron clonar dos genes que codifican para adenilato quinasas (TzAdK1 y TzAdK2). El análisis de las secuencias determinó que estas proteínas poseen dominios altamente conservados con otras adenilato quinasas. El producto de estos dos genes correspondería a la forma procariótica de la enzima, es decir, presentan la inserción típica de las variantes largas. Se estudió su organización genómica, mostrando que cada gen está presente en copia única por genoma haploide y en un análisis de Northern Blot se pudo determinar que ambos genes se expresan tanto en el estadío epimastigote como tripomastigote. Mediante la expresión de ambos genes en Escherichia coli, se demostró su funcionalidad. Utilizando información derivada del proyecto genoma de Trypanosoma cruzi se pudieron identificar otros cinco genes correspondientes a posibles adenilato quinasas con distinta localización subcelular.