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La Enfermedad de Chagas es una zoonosis endémica en América Latina causada por el parásito protozoario Trypanosoma cruzi que afecta a millones de personas. Una característica común de los organismos protozoarios adaptados al parasitismo es el reemplazo, a lo largo de su evolución, de las rutas metabólicas de biosíntesis por sistemas de transporte de metabolitos esenciales desde el medio extracelular. Consecuentemente, en muchas vías metabólicas la disponibilidad intracelular de sustratos e intermediarios depende únicamente de procesos de transporte. Esto hace que el transporte sea un mecanismo fundamental para la supervivencia del parásito y lo señala como potencial blanco terapéutico. Gran parte del metabolismo de T. cruzi está basado en la utilización de aminoácidos ya que, además de la glucosa, estos son utilizados como fuentes de energía y carbono. La prolina está entre los principales metabolitos que el parásito consume como fuente de carbono y energía, y además está involucrado en la metaciclogénesis y en la resistencia a estrés oxidativo. En este trabajo pudimos identificar un transportador de prolina (TcAAP1) perteneciente a la familia de permeasas denominada TcAAAP (?Amino Acids/Auxin Permeases). Esta proteína de 476 aminoácidos posee entre 9 y 10 pasos transmembrana predichos, con un extremo N-terminal variable de 90 aminoácidos, siendo esta estructura similar al resto de los miembros de esta familia. Mediante ensayos de complementación utilizando levaduras carentes tanto de la permeasa general de aminoácidos (gap1) como del transportador de prolina (put4), se pudo establecer que el gen TcAAP1 permite a las levaduras crecer en un medio mínimo utilizando prolina como única fuente de nitrógeno. En ensayos de transporte de prolina, se determinó que las levaduras transformadas con el gen TcAAP1 poseían una tasa de incorporación de este aminoácido un orden de magnitud mayor a los controles. Por último, se generaron dos modelos de parásitos epimastigotes transgénicos de T. cruzi. El primero involucra parásitos que sobre-expresan el transportador TcAAP1 fusionado a una proteína fluorescente; utilizando microscopía de fluorescencia se pudo determinar la ubicación de esta permeasa en una estructura de alto intercambio con el medio denominada bolsillo flagelar. El segundo modelo implica parásitos que sobre-expresan la permeasa de prolina, y será utilizado para corroborar la función del transportador TcAAP1 en T. cruzi, y para ensayos de diferenciación in vitro y resistencia a estrés oxidativo.

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