Las L-asparaginasas de Trypanosoma cruzi como alternativa terapeutica en la leucemia linfoblastica aguda

DI GIROLAMO, FABIO; MIRANDA, MARIANA; CANEPA, GASPAR; SAYE, MELISA; CAMARA, MARIA DE LOS MILAGROS; PEREIRA, CA

CABA

Jornada; XI Jornadas Cient¨ªficas del Instituto Lanari; 2012

IDIM

En la actualidad existe una necesidad de encontrar nuevas L-asparaginasas eucariotas para ser usadas como alternativas terap¨¦uticas m¨¢s eficaces que la de E. coli, utilizada en el tratamiento en leucemias y linfomas. Estudiando el metabolismo de aspartato en Trypanosoma cruzi, el agente etiol¨®gico de la Enfermedad de Chagas, se detectaron dos genes de posibles L-asparaginasas en su genoma. Estos genes fueron clonados y expresados con el objetivo de analizar sus propiedades fisicoqu¨ªmicas y biol¨®gicas. Los dos genes, denominados TcNasa-1 y TcNasa-2, codifican para prote¨ªnas de 54.6 y 43.3 kDa de peso molecular, con puntos isoel¨¦ctricos notablemente diferentes, 5.8 y 8.6 respectivamente. Estas prote¨ªnas poseen una identidad de secuencia de s¨®lo el 22% en amino¨¢cidos entre s¨ª y ambas tienen una escasa similitud con las L-asparaginasas denominadas tipo I bacterianas, cuya localizaci¨®n es citos¨®lica. TcNasa-2 fue expresada en E. coli con un alto rendimiento de 0.5 gr/litro de fermentaci¨®n y fue purificada con una t¨¦cnica sencilla, con un rendimiento del 50%. Su actividad enzim¨¢tica fue verificada y se estudiaron sus propiedades bioqu¨ªmicas. El pH ¨®ptimo fue determinado en 5 y su Km y Vmax fueron calculadas en 10.7 ¦ÌM y 30.3 ¦Ìmol/min.mg, respectivamente. Adem¨¢s, TcNasa-2 posee una actividad glutaminasa residual menor al 1%, lo cual es significativo si se compara con el 5-10 % de las asparaginasas bacterianas. En este momento se est¨¢ evaluando el efecto de la TcNasa-2 en comparaci¨®n con la asparaginasa comercial de E. coli, sobre un modelo de leucemia en la l¨ªnea celular K-562. Por ¨²ltimo, podemos especular que una L-asparaginasa eucariota de un parasito humano, como T. cruzi, sea menos inmunog¨¦nica que los productos bacterianos disponibles en la actualidad, ya que estas ¨²ltimas producen reacciones de hipersensibilidad, alergia y anafilaxia, llegando en algunos casos a la muerte del paciente. Otro efecto no deseado es la inactivaci¨®n de la enzima por el sistema inmune en el 60% de los pacientes luego de varias aplicaciones.