INVESTIGADORES
PEREIRA Claudio Alejandro
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la modulación de trans-splicing mediada por un aptámero para tetraciclina
Autor/es:
BOUVIER, LEON; CAMARA, MARIA DE LOS MILAGROS; MIRANDA, MARIANA; PEREIRA, CA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias (SAP); 2011
Institución organizadora:
SAP
Resumen:
La transcripción en los organismos tripanosomátidos es de naturaleza policistrónica y la expresión de las secuencias codificantes que forman parte deltranscripto primario depende de la reacción de trans-splicing. En esta se adiciona el fragmento ?SL? que aporta la estructura CAP al 5�� de la secuenciacodificante localizada río abajo y se poliadenila el 3�� de la secuencia codificante situada río arriba, determinando así la maduración de los mensajeros.Numerosos componentes de la maquinaria encargada se encuentran conservados con la responsable del cis-splicing en otros organismos eucariotas.En levaduras fue posible modular la reacción de splicing mediante la adición de un ligando específico para un aptámero estratégicamente ubicadopróximo al sitio de splicing 5��. Estos motivos de ARN seleccionados de forma artificial por su capacidad de unión a moléculas complejas, en presenciade las mismas rigidizan su estructura e interferirían de manera estérica con el reconocimiento de señales esenciales para las reacciones de splicing.En este trabajo se construyó un vector integrativo basado en el pTREX (Vazquez y Levin, 1999) con una secuencia intergénica HX1 modificada porinserción de un aptámero para tetraciclina próximo al sitio aceptor del fragmento SL. Se estudió la capacidad de la tetraciclina para modular la expresiónde la proteína verde fluorescente, utilizada como gen reportero, en epimastigotes de Trypanosoma cruzi transgénicos para esta construcción. Seobserva una correlación entre la concentración de tetraciclina en el cultivo y la disminución en los niveles de expresión de la proteína verde fluorescente.El refinamiento de construcciones basadas en aptámeros ofrece la posibilidad de desarrollar herramientas de manipulación genética con las cualesmodular la expresión de genes de interés. A su vez estos motivos de ARN constituyen novedosos elementos para el estudio de los mecanismos de transsplicingen organismos kinetoplástidos.