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La forma más frecuente y convencional de manipulación genética empleada en Trypanosoma cruzi consiste en la introducción de vectores de expresión.Estas herramientas se pueden dividir en variantes más simples como vectores episomales y aquellos derivados que al incluir promotores ribosomalesadquieren naturaleza integrativa. Por dos décadas la estructura constituyente más exitosa y estable de estas moléculas corresponde al marcador de selecciónpara G418 originalmente desarrollado para el vector pTEX (Kelly y col. 1992). Sin embargo formas más ambiciosas de manipulación genéticarequieren marcadores de selección adicionales.En este trabajo se desarrollaron y construyeron series de vectores de expresión para la proteína verde fluorescente tanto de naturaleza episomal comointegrativos para los genes de resistencia a phleomicina, blasticidina S, higromicina B, G418 y puromicina. Se evaluaron los niveles de expresión derivadosde cada uno de los vectores en líneas de parásitos seleccionados con los respectivos agentes selectivos. Con los vectores integrativos fue posibleobtener elevados niveles de expresión en los parásitos seleccionados con G418, higromicina B y blasticidina S. Por su parte en los equivalentes relativosa phleomicina, si bien se mostraron resistentes al antibiótico no se pudo detectar expresión del gen reportero. De manera similar en los parásitostransfectados con las construcciones episomales los niveles de expresión fueron menores y los antibióticos más efectivos resultaron ser G418, higromicinaB y blasticidina S. En este contexto la construcción con el gen de resistencia a phleomicina, no solo confirió resistencia sino que fue posible detectartanto de forma microscópica como inmunológica la expresión de la proteína verde fluorescente en los parásitos relativos a la misma. Sin importarel tipo de vector, no fue posible obtener líneas resistentes a puromicina.Estas herramientas no solo constituyen formas atractivas para la expresión simultanea de múltiples secuencias codificantes de interés, sino que tambiénpermiten establecer estrategias de selección para diferentes cepas y metodologías de cultivo.

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