El ciclo de vida del Trypanosoma cruzi in vitro: Obtención de tripomastigotes y amastigotes transgénicos

CAMARA, MARIA DE LOS MILAGROS; BOUVIER, LEON; MIRANDA, MARIANA; PEREIRA, CA

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias (SAP); 2011

SAP

La mayoría de los estudios utilizando parásitos modificados genéticamente de T. cruzi se realizan en el estadio de epimastigote debido a la facilidad ensu cultivo y en las técnicas de transfección. Sin embargo, en la mayoría de los casos sería de gran utilidad disponer de parásitos transgénicos en los estadiosde tripomastigote y amastigote que son los más relevantes a nivel clínico. En el presente trabajo presentamos un método simple de diferenciaciónde las cepas CL Brener e Y a través de tratamientos en medio LIT a pH acido y posterior infección de cultivos celulares. Los porcentajes de diferenciaciónpara las cepas estudiadas fueron aproximadamente del 40%. Luego de infecciones sucesivas los parásitos fueron nuevamente diferenciados detripomastigote y amastigote a epimastigote mediante un pasaje a medio LIT y a estos últimos se los transfectó con plásmidos de expresión con genesde proteínas fluorescentes. Una vez obtenidos los parásitos transgénicos se infectaron células con los mismos, obteniendo estadios infectivos que expresabandichas construcciones. Mediante esta técnica simple podemos obtener en el laboratorio los diferentes estadios del ciclo de vida de T. cruzi a partirde una cepa de baja infectividad modificada o no genéticamente.