Búsqueda proteómica y caracterización funcional de marcadores diferenciales de estrés acido en Sinorhizobium meliloti simbionte de alfalfa.

DRAGUI W., DEL PAPA, M. F., PISTORIO M., LOZANO M., GIUSTI M.A., TORRES TEJERIZO G. Y A. LAGARES.

Fundación Instituto Leloir, Buenos Aires

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología general-SAMIGE; 2007

SAMIGE

El estrés ácido presente en los suelos cultivables es uno de los principales factores que afectan el normal establecimiento y desarrollo de la simbiosis entre alfalfa y Sinorhizobium meliloti actuando en detrimento de una correcta nutrición nitrogenada de la planta. Superar dicho factor para la obtención de una simbiosis exitosa requiere del conocimiento de los mecanismos moleculares implicados en la tolerancia a la acidez, especialmente en el rizobio, el cual es severamente afectado por dicho estrés. Con el objeto de buscar marcadores asociados al estrés ácido se caracterizaron los proteomas de rizobios crecidos en condiciones neutras y ácidas utilizando electroforesis bidimensional y MALDI-TOF-PMF para la identificación de las especies diferenciales. Del total de proteínas analizadas, 7,8% se sobre-expresaron diferencialmente en la condición ácida, mientras que la expresión fue reprimida en 5,2% del proteoma. Mientras en la condición neutra se observó la sobre-expresión de proteínas mayoritariamente asociadas al metabolismo de aminoácidos, en la condición ácida se sobre-expresaron marcadores asociados particularmente a la generación de energía, metabolismo de glúcidos, y el aparato de traducción. Hemos identificado en total más de 30 marcadores diferenciales entre ambas condiciones, varios de ellos con función aun desconocida. La expresión de dichos marcadores tuvo una muy alta correlación con resultados del transcriptoma que también hemos analizado. Para investigar la posible participación de los marcadores diferenciales en la tolerancia al estrés ácido, mutantes por transposición en varios de los marcadores fueron evaluados en su capacidad de crecer en condiciones ácidas y neutras. En fase logarítmica temprana se observaron dos tipos de comportamiento: mutantes con crecimiento comparable al de la cepa salvaje, y mutantes cuya tasa de crecimiento fue menor. Resultó particularmente interesante que los mutantes alterados correspondieron mayoritariamente a los alterados en marcadores sobre-expresados en acidez. El estudio que hemos realizado demuestra que, para la condición de estrés que hemos analizado, la aplicación de una aproximación proteómica provee no sólo un conjunto de marcadores de expresión diferencial, sino la posibilidad de identificar entre ellos varios marcadores cuya alteración conduce a una clara disfunción fenotípica asociada al estrés en estudio.