Oxidación enzimática del ácido caféico en presencia de l-cisteina. aplicación amperométrica

MARTINEZ, N.; SALINAS, E.; BERTOLINO, F.A.; SANZ M.I.; RABA J.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; II Congreso Iberoamericano y IV Argentino de Química Analítica; 2007

II Congreso Iberoamericano y IV Argentino de Química Analítica

El primer paso en la oxidación de un o-difenol, tal como el ácido cafeico (CAF), es la formación de una o-quinona. Esta reacción puede llevarse a cabo por varias vías, incluyendo la enzimática.  Una vez que  la o-quinona del ácido cafeico (CAF-o-quinona) se ha formado, esta tiende a reaccionar con numerosos reactivos nucleofílicos, incluyendo aquellos que posen grupos sulfhidrilo como la L-Cisteína. La tirosinasa (Tyr), [1.11.1.7] inmovilizada sobre un disco rotatorio, cataliza la oxidación de CAF a CAF-o-Q . Estos productos son electroquímicamente reducidos sobre la superficie de un electrodo de carbono vítreo aplicando un potencial de - 150 mV. Cuando se adiciona L-cisteína  a la solución, este aminoácido, participa en una reacción de adición tipo Michael con  CAF-o-Q para formar un derivado quinónico (aducto). De esta manera, en la voltametría cíclica se produce una disminución del pico de corriente de reducción,  proporcional al incremento de la concentración  de la L-Cisteína adicionada a la solución. Con este método se determinó cisteína en un rango de 0.05 a 80 uM (r = 0.998) y un  límite de detección de 0.6 nM para cisteína procesando al menos 50 muestras por hora. La interferencia de distintas especies, tales como N-acetil-cisteína, glutation, metionina, captopril y mercaptoglicina  fueron  evaluadas, no presentando cambios apreciables en la respuesta voltamétrica de CAF. Este método es relativamente selectivo para la detección  de L-Cisteína