Estudio del potencial antiviral de compuestos naturales en infecciones in vitro por Rotavirus

JULIETA THOMÉ CHAPINI; MARÍA CECILIA GIMENEZ; ANDREA PERALTA; MARÍA ISABEL COLOMBO; LAURA RUTH DELGUI

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

Comité Organizador del XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016

Rotavirus (RV) es el principal agente causal de gastroenteritis aguda viral en niños menores de 5 años. En Argentina genera anualmente unas 23.100 hospitalizaciones, es por esto que a partir del año 2015 se incorporó la vacuna anti RV al Calendario Nacional de Vacunación. Si bien se ha evidenciado la utilidad de la misma, su eficacia y seguridad aún continúan siendo evaluadas.El Ácido Ursólico (AU) es un triterpeno que se encuentra formando parte de la estructura de saponinas en diversas plantas. Está demostrado que ejerce múltiples acciones biológicas: antiinflamatorias, antitumorales y antivirales. Partiendo de esta última premisa, y teniendo en cuenta la importancia del patógeno antes mencionado, así como la dificultad en la prevención de la enfermedad que provoca, el objetivo de nuestro grupo de investigación ha sido evaluar la posible actividad antiviral del AU frente a infecciones in vitro por RV.Utilizamos la cepa de RV de simio, SA-11 y la línea celular susceptible, MA 104 como modelos de la enfermedad. En primer lugar, con el fin de determinar las concentraciones no citotóxicas del compuesto AU, se incubaron las células con concentraciones crecientes del compuesto a diferentes tiempos, determinando cuantitativamente su nivel de citotoxicidad. En segunda instancia, con el objetivo de descartar que el AU tuviera acción virucida, evaluamos el título de preparaciones de viriones de RV que habían sido incubados con AU, empleando la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Posteriormente, evaluamos el efecto antiviral del AU mediante dos técnicas diferentes. Por un lado, cuantificamos el número de partículas virales infectivas intra- y extra-celulares presentes en células pre-tratadas con AU o mantenidas en situación control empleando la técnica de titulación por IFI. Por último, con el objetivo de abordar el estudio utilizando una metodología adicional, evaluamos la producción de las proteínas virales estructurales VP6 y VP7 en células pre-tratadas con AU o en condición control e infectadas con RV, empleando la técnica de Western Blot. Nuestros resultados indicaron que el tratamiento de las células con 10 μM de AU afectó la producción de una nueva progenie viral de RV, observado tanto por la disminución de su título intra- y extra-celular, como por la disminución en los niveles de proteínas virales en las células infectadas. Además, este efecto antiviral no se debió a un efecto virucida del compuesto, ya que no se modificó el título de viriones que fueron tratados con el mismo. Los resultados obtenidos hasta el momento indican que el compuesto AU interfiere en una o más etapas del ciclo de replicación de RV. Estos resultados son de suma importancia para continuar con un estudio detallado del mecanismo de acción del AU frente a infecciones por RV, analizando blancos y mecanismos moleculares que potencialmente favorezcan el desarrollo de nuevas estrategias de control y tratamiento de la gastroenteritis aguda infantil.