El 17beta-estradiol a través del REalfa estimula la translocación del REalfa endógeno intracelular a la membrana plasmática y activa la vía PKC/ERK1/2 en células adenohipofisarias normales

GUTI¨¦RREZ S.; SOSA L.; PETITI J. P.; MUKDSI J. H.; CAMBIASO M. J,; DE PAUL A.L.; TORRES A. I.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reuniónn Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

En continuación con investigaciones previas en las que demostramos que la actividad secretoria y proliferativa de células adenohipofisarias es regulada por E2 con la participación RE de membrana, nos propusimos analizar la modulación de los diferentes pooles de RE por acción del 17beta-estradiol (E2) en adenohipófisis. Cultivos primarios adenohipofisarios de rata hembra se trataron con 10 nM de E2 y con un agonista del REalfa (PPT) por 0, 5, 15 y 30min. Se inmunomarcó el REalfa mediante microscopía electrónica (ME, técnica de células intactas) y confocal (MC), citometría de flujo (FACS, en células sin permeabilizar) y por western blot (WB, por biotinilación de proteínas de superficie). Además, se detectó la activación de de PKC (por MC) y de ERK1/2 (por WB). Análisis estadístico ANOVA-Fisher. Nuestros resultados muestran la presencia del REalfa en la membrana plasmática de lactotropas, gonadotropas y somatotropas por inmunomarcación con ME. Mediante biotinilación de proteínas de superficie se detectó el full-length del REalfa (66 KDa) en la fracción del pellet (proteínas de membrana) siendo esta expresión incrementada por E2 y PPT, en el sobrenadante (proteínas intracelulares) se observó además una isoforma de 55 KDa. Mediante MC el REalfa fue identificado en núcleo y citoplasma y luego de la estimulación con E2 o PPT fue detectado además en la membrana plasmática, colocalizando con el marcador de membrana Concanavalin A. El 7.7 % de lactotropas expresaron REalfa en la superficie mediante FACS, incrementando 23.0 % la intensidad de fluorescencia luego del tratamiento con E2. A partir de los 5 min de estímulo con E2 o PPT se detectó activación de la vía PKC/ERK1/2.   Nuestros resultados demuestran que el REalfa está localizado en la superficie de células adenohipofisarias normales sugiriendo que el E2 a través del REalfa estimula la translocación del REalfa endógeno intracelular a la membrana plasmática.