El efecto anti-mitogénico del TGF-beta1 en células adenohipofisarias tumorales es potenciado por inhibidores de las vías PI3K/Akt y MEK/ERK1/2

PETITI J. P.; SABATINO M. E.; GUTI¨¦RREZ S.; SOSA L.; VACA A.; DE PAUL A.L.; TORRES A. I.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica; 2011

TGF-b1 es un supresor tumoral y la pérdida genética o epigenética de su señalización induciría la formación y progresión de  tumores. Uno de los mecanismos por el cual TGF-b1 actúa como inhibidor de la proliferación es induciendo el arresto del ciclo celular en la fase G1. TGF-b1 ejerce su acción a través de la activación de Smads, aunque existen evidencias que involucran otras vías de señalización. Nuestro objetivo fue determinar la contribución de PKCs, la vía PI3K/Akt y MEK/ERK1/2 como modulares de la respuesta anti-proliferativa inducida por TGF-b1 en céulas adenohipofisarias tumorales. Cultivos de c¨¦lulas GH3B6 se trataron con TGF-b1 (4ng/ml, 24h) s¨®lo o con una pre-incubaci¨®n de 30 min con los inhibidores: LY294002 (PI3K 10uM) y PD98059 (MEK1/2; 50uM). Se analiz¨® el ciclo celular por citometr¨ªa de flujo y la expresi¨®n de p-Smad2/3, PKCa, p-Akt y p-ERK1/2 por WB. La translocaci¨®n subcelular de p-Smad2/3 y PKCa se observ¨® por microscop¨ªa confocal. Estad¨ªstica: ANOVA-Fisher. El tratamiento con TGF-b1 indujo un aumento de c¨¦lulas en fase G0/G1 (p<0.05), efecto que fue potenciado por  los inhibidores de PI3K y MEK1/2 (p<0.05). En forma paralela TGF-b1 indujo fosforilaci¨®n de Smad2/3 la cual se increment¨® luego del pre-tratamiento con LY294002 y PD98059. Por el contrario, TGF-b1 disminuy¨® la expresi¨®n de PKCa y la fosforilaci¨®n de ERK1/2, previamente relacionadas con la inducci¨®n del ciclo de c¨¦lulas GH3B6.  La microscop¨ªa confocal revel¨® translocaci¨®n de Smad2/3 desde el citosol al n¨²cleo y una redistribuci¨®n de PKCa desde el citosol a la membrana plasm¨¢tica luego del tratamiento con TGF-b1. Estos resultados demuestran que el efecto anti-mitog¨¦nico del TGF-b1 en c¨¦lulas adenohipofisarias tumorales es mediado por la activaci¨®n de Smad2/3 y potenciado por la inhibici¨®n de las v¨ªas PI3K/Akt y PKCa/MEK/ERK1/2. La identificaci¨®n de mediadores intracelulares no cl¨¢sicos que participan en el efecto inhibitorio de TGF-b1 permitir¨ªa postular nuevos blancos terap¨¦uticos.