Diferente respuesta proliferativa de las células lactotropas de rata y de la línea tumoral GH3B6, inducida por éster de forbol, activador de la proteína quinasa C (PKC)

PETITI J. P.; DE PAUL A.L,; AOKI A.; TORRES A.I.

Córdoba

Congreso; V Congreso de la Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología.; 2004

Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología

INTRODUCCIÓN:  La proteína quinasa C (PKC) consiste de 11 isoformas, involucradas en diferentes procesos  como proliferación celular, diferenciación y apoptosis. La activación de las isoformas de PKC por ésteres de forbol (promotor tumoral) genera cambios en su localización subcelular, lo cual se lo relaciona con funciones específicas. Altos niveles de PKC han sido asociados  con transformaciones malignas en gran número de tumores incluyendo cáncer de mama, pulmón y colon, convirtiéndose de esta manera en blanco atractivo en la terapia del cáncer. El objetivo de este trabajo fue determinar la participación de las diferentes isoformas de PKC en la proliferación de células lactotropas normales y tumorales inducida por éster de forbol. MATERIALES Y METODOS:  Se realizaron cultivos de adenohipófisis de ratas hembras y de la línea tumoral GH3B6 tratadas con éster de forbol (PMA), en las siguientes condiciones: Experimento 1: para observar el efecto de la activación de las PKC, las células fueron tratadas con PMA (50 y 400 nM) por 15 min; Experimento 2: para analizar la desregulación de las PKC, las células fueron tratadas con PMA (50 y 400 nM) por 3 y 5 horas. La proliferación de células lactotropas se cuantificó mediante la doble  inmunomarcación de  bromodeoxiuridina y PRL. La expresión de las isoformas de las PKC alfa, epsilon y delta, se determinó por western blot, en los extractos totales de cultivos primarios adenohipofisiarios y de la línea tumoral GH3B6 sin tratamiento con PMA. Los resultados fueron analizados por ANOVA-Tuckey. RESULTADOS:  La expresión de la PKC alfa y epsilon, fue significativamente mayor en la línea tumoral respecto a la observada en cultivo primario adenohipofisiario. La isoforma PKC delta no mostró diferencias significativas entre los tipos celulares. La incubación de células adenohipofisiarias normales y de la línea tumoral con PMA por 15 min. aumentó significativamente la proliferación de células lactotropas con respecto al control (P< 0.05), y en forma proporcional a la concentración de PMA utilizada: cultivo normal: 50 nM 42.17%, 400 nM 64 %; cultivo tumoral: 50 nM 27.4 %, 400 nM 49.5 %.  El tratamiento con PMA (50 nM) por 5 horas disminuyó la proliferación de células lactotropas con respecto a la observada en el tratamiento de 15 min (p< 0.05) en ambos cultivos celulares (cultivo normal: 87.13%, cultivo tumoral: 27.23 %). Sin embargo, sólo en el cultivo normal esta disminución fue significativamente menor con respecto al control, cuyos valores fueron un 40 % más bajos (p< 0.001). En la línea tumoral GH3B6 este efecto fue observado cuando las células  fueron incubadas con concentraciones mayores de PMA (400 nM) durante un tiempo menor de exposición (3 h). En estas condiciones el porcentaje de proliferación celular disminuyó un 32.6 % (P < 0.01) con respecto al control. CONCLUSIONES: La mayor expresión de las isoformas de PKC relacionadas con la proliferación celular (PKC alfa y epsilon) en células de la línea tumoral, estaría estrechamente vinculada con la elevada tasa proliferativa, característica de este tipo celular. La activación de PKC con éster de forbol por 15 min. produjo un aumento de la proliferación de células lactotropas en los dos modelos analizados, probablemente por una traslocación de la enzima a la membrana plasmática y una posterior activación de vías de transducción de señales mitogénicas. La disminución de la proliferación celular observada luego de la activación prolongada de PKC con PMA sería causada por una desregulación de esta enzima. Los diferentes comportamientos observados en la proliferación de células lactotropas provenientes de hipófisis normales y de la línea tumoral GH3B6, se producirían como consecuencia de la activación y desregulación de PKC inducidos por PMA y a las características funcionales de los tipos celulares analizados.