Efecto proliferativo de células lactotropas inducido por EGF: activación de las ERK 1/2 por acción de PKCepsilon

DE PAUL A.L.; GUTIÉRREZ S.; PETITI J.P.; AOKI A.; TORRES A.I.

Mar del Plata

Congreso; 50 Reunión Anual de la SAIC; 2005

SAIC

Estudios previos realizados en nuestro laboratorio demostraron un aumento de la expresión de la Proteína Quinasa C (PKC) isoforma epsilon asociado con la proliferación de células las lactotropas inducida por EGF. En este trabajo nos propusimos determinar la posible interacción de PKC en la activación de la cascada de las quinasas reguladas por señales extracelulares (ERK 1/2) en los procesos proliferativos y biosintéticos de células lactotropas inducidos por EGF. Cultivos primarios adenohipofisarios de ratas hembras adultas fueron tratados por 24h con EGF (25ng/ml) sólo o combinado con bisindolymaleimide I (BIM) (0.5; 2; 5 y 10 uM), un inhibidor de las PKC, incorporado 1h antes que el EGF. Se evaluó la proliferación celular mediante la doble detección inmunocitoquímica de BrdU y prolactina (PRL) (método ABC) y se procesaron las células para evaluar las modificaciones ultraestructurales. Se cuantificó por western blot la expresión de PKC-epsilon, ERK1/2- fosforilada (ERK 1/2-P) y ERK total (ERK-T) así como los niveles de PRL intracelular. Para el análisis de los datos, se aplicó test ANOVA-Tukey. EGF aumentó la actividad mitótica de las lactotropas (p<0.001), así como la expresión de la PKC epsilon y ERK1/2-P. Un incremento similar se obtuvo en los valores de PRL intracelular. El análisis ultraestructural reveló una activación de las organelas proteinopoyéticas involucradas en la síntesis de PRL. El tratamiento con las dosis mayores de BIM (5 y 10uM) revirtió parcialmente (25% y 50% respectivamente; p<0.001) la proliferación de lactotropas inducida por EGF, así como los niveles de ERK1/2-P. Los niveles de la ERK-T se mantuvieron invariables frente a EGF sólo o en combinación con BIM. Los resultados indican que la vía de las ERK 1/2 participa en la proliferación y actividad biosintética de las células lactotropas inducida por EGF. Se demuestra que la PKC isoforma epsilon contribuiría a la activación de esta cascada de señales, exponiendo una interacción entre ambas enzimas.