Activación diferencial de las isoformas de PKC epsilon y delta en la proliferación de células lactotropas inducidas por PMA

PETITI J.P.; DE PAUL A.L.; GUTIÉRREZ S.; PALMERI C.; TORRES A.I.

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Anual de la SAIC; 2006

SAIC

La activación de proteina quinasa C (PKC) ha sido implicada en la proliferación de células adenohipofisarias, sin embargo el rol de específico de cada isoformas aún no ha sido dilucidado. Objetivo: establecer la relación entre la activación de las isoformas de PKC alpha, epsilon y delta y la proliferación de células lactotropas inducida por ester de forbol (PMA), a través de la vía de MAPquinasa (ERK1/2). Cultivos adenohipofisarios de rata se incubaron con PMA (400 nM, 15min y 3h) y con un inhibidor específico de las ERK1/2 (PD 98059 50 y 100 uM, 30min). Se cuantificó la proliferación de lactotropas por doble inmunomarcación para BrdU y PRL. La activación de las isoformas de PKC por PMA se determinó en fracción de membrana y citosólica por western blot. Los niveles de mRNA de las isoformas, fueron  estimados por PCR. Análisis estadístico utilizado: ANOVA-Fisher. El PMA por 15min aumentó un 37,3% la proliferación de lactotropas (p< 0.001), mientras que el tratamiento prolongado (3h) la disminuyó con respecto a los 15min (p< 0.001). El PD98059 inhibió el efecto proliferativo de PMA a los 15min un 41% con 50 uM y 54 % con 100 uM (p<0.05). Luego de la incubación con PMA, las tres isoformas translocaron significativamente (p<0.05) a la fracción de membrana, siendo la PKC epsilon la que mostró el mayor porcentaje de activación (77%). En forma paralela, en las fracciones citosólicas se observó una disminución de la expresión de las PKC alpha, epsilon y delta. La expresión del mRNA de las tres isoformas luego de la estimulación con PMA aumentó significativamente (p<0.05) a tiempos cortos, lo cual sería indicativo de una autorregulación en el proceso transcripcional de las PKC. Estos resultados demuestran que la translocación de las PKC apha epsilon y delta a la fracción de membrana luego de la estimulación con PMA regula la proliferación de células lactotropas a través de la vía MAP quinasa ERK1/2, destacando la participación de la isoforma epsilon en este proceso.