Activación de la vía PI3K/AKT en sinaptosomas de corteza cerebral de rata por stress oxidativo

URANGA, ROMINA; MATEOS, MELINA; GIUSTO, NORMA; SALVADOR, GABRIELA

Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina.

Jornada; III Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

INIBIBB

La terminal sináptica concentra múltiples vías de transducción de señal que regulan la plasticidad neuronal y la supervivencia en sistema nervioso central. Se ha comprobado, además, que las primeras manifestaciones implicadas en varias enfermedades neurodegenerativas ocurren en las sinapsis. Nuestro objetivo fue identificar componentes de la vía PI3K/Akt en sinaptosomas de corteza cerebral de rata y evaluar la participación de esta vía bajo condiciones de stress oxidativo. Utilizando anticuerpos dirigidos contra la subunidad regulatoria p85 de la PI3K identificamos, por la técnica de Western Blot, una proteína de aproximadamente 90 kDa de PM en sinaptosomas metabólicamente activos. De igual manera determinamos la presencia de la quinasa Akt en este sistema. Para evaluar el efecto del stress oxidativo sobre la vía en estudio trabajamos con sinaptosomas metabólicamente activos o sometidos a injuria oxidativa inducida por FeSO4. El estado metabólico de los sinaptosomas en las distintas condiciones de incubación se evaluó midiendo la incorporación de glutamato. En los controles la captación de glutamato se mantuvo constante durante los distintos tiempos de incubación, mientras que la presencia de FeSO4 provocó una disminución en la captación del aminoácido en función del tiempo. Además observamos que la incubación con FeSO4 aumentó la fosforilación de Akt y los niveles de proteínas fosforiladas en tirosinas. Paralelamente se evaluó la actividad de la PI3K en las condiciones descriptas utilizando ATP­ [g-32P]. La fosforilación del fosfatidilinositol-monofosfato aumentó un 42% en los sinaptosomas sometidos a stress oxidativo y tanto wortmanina como LY294002, inhibidores específicos de la PI3K, revirtieron este efecto. Nuestros resultados demuestran que bajo condiciones de stress oxidativo se activa la vía PI3K/Akt en terminales sinápticas aisladas.