Actividad de fosfolipasa C específica para fosfatidilcolina en sinaptosomas de corteza cerebral de rata

MATEOS, MELINA; URANGA, ROMINA; SALVADOR, GABRIELA; GIUSTO, NORMA

Villa Giardino, Córdoba, Argentina.

Taller; VII Taller Argentino de Neurociencias; 2005

Sociedad Argentina de Neuroquímica

La fosfatidilcolina (PC) es uno de los fosfolípidos mayoritarios en células de mamíferos y juega un rol fundamental en la estructura de las membranas celulares así como en mecanismos de señalización intracelular siendo fuente de segundos mensajeros lipídicos tales como ácido fosfatídico (PA), ácido araquidónico (AA) y diacilglicérido (DAG). El DAG puede ser generado a partir de la hidrólisis de distintos fosfolípidos y participa activamente en diversas vías de transducción de señal. La PC puede generar DAG por activación de diversas enzimas: la vía de la fosfolipasa D y de la hidrolasa de PA (PLD/PAP) y la hidrólisis de PC a través de una fosfolipasa C (PC-PLC). Sin embargo la PC-PLC es una de las vías de señalización lipídica menos exploradas en sistema nervioso central al momento. En diversos tipos celulares se ha reportado la participación de esta enzima en distintos eventos intracelulares como respuesta a factores de crecimiento, citoquinas, proliferación y muerte celular. Nuestro objetivo fue continuar con el estudio y la caracterización de las vías generadoras de segundos mensajeros lipídicos en sistema nervioso central. Para ello purificamos sinaptosomas (Syn) de corteza cerebral (CC) de ratas adultas de la cepa Wistar, los cuales fueron utilizados metabólicamente activos para realizar nuestros ensayos. En este sistema experimental pudimos determinar la actividad de una fosfolipasa C capaz de hidrolizar PC y generar DAG. La caracterización de la misma demostró que tiene un pH óptimo alrededor de 7 y que es inhibida por la presencia de concentraciones milimolares de Calcio. Ensayos con agentes tensioactivos como el Tritón-X-100 y el Deoxicolato de Sodio estimularon su actividad. Para determinar la localización de la PC-PLC, los Syn se lisaron y se aisló la membrana plasmática sinaptosomal (SPM). La actividad de PC-PLC permaneció mayoritariamente en la fracción SPM, demostrando que la PC-PLC es una proteína de membrana. Para corroborar la naturaleza del DAG generado a partir de PC se utilizaron inhibidores y marcadores de la vía PLD/PAP. Tanto el propranolol como el etanol inhibieron la generación de DAG en un 25% demostrando que, en las condiciones de ensayo, el 75% del diacilglicerol generado proviene de la hidrólisis de PC catalizada por PLC. Previamente en nuestro laboratorio se demostró que la Insulina estimula la vía PLD/PAP, sin embargo ni la Insulina ni el IGF-1 estimularon la generación de DAG a través de PC-PLC. Nuestros resultados demuestran la presencia de una vía alternativa a la PLD/PAP para la generación de DAG a través de PC en sinaptosomas de CC de rata. La existencia de la PC-PLC en sistema nervioso central abre interesantes expectativas para el estudio de la implicancia de la misma en procesos de transducción de señal neuronal.