Participación de la caspasa 3 en la apoptosis de folículos ováricos inducida por un inhibidor de VEGF (Trap)

ABRAMOVICH DALHIA; PARBORELL FERNANDA; TESONE MARTA

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2006

VEGF es uno de los principales reguladores involucrados en la angiogénesis ovárica, expresándose junto con su receptor (Flk1) en células de granulosa y tecales. En estudios previos mostramos que la administración de un inhibidor de VEGF intrabursa en ovario de rata produce un aumento en la apoptosis de células foliculares, provocando una disminución en el número de folículos periovulatorios y un aumento en el número de folículos atrésicos. Además, se observó una disminución de la relación BCL2/BAX y BCLXL/BCLXs. Para dilucidar si estos cambios tienen un efecto sobre la cascada de caspasas, se evaluaron los niveles y localización de la principal efectora: caspasa 3 y de PARP, sustrato de la caspasa 3 e inhibidor de la DNAsa I. Ratas prepúberes tratadas con eCG fueron inyectadas con un inhibidor de VEGF (Trap: quimera Flt-1/Fc recombinante, 0.5 ug) en un ovario y el  contralateral fue inyectado con vehículo (C). Los ovarios fueron extraídos a las 48 hs. Folículos preovulatorios (>400 um) aislados por microdisección se utilizaron para Western blots y para medir la fragmentación de ADN (ladder) en geles de agarosa. El grupo Trap mostró un aumento en la fragmentación apoptótica de ADN respecto al grupo C (C: 297.0±4.7; Trap: 429.3±36.6, p<0.05), mayores niveles del fragmento p17 activo de caspasa 3 (C: 0.18± 0.04; Trap: 0.33± 0.08, p<0.05) y una disminución en la proteína PARP  no procesada (C: 0.33±0.04; Trap: 0,15±0.03, p<0.01) (datos expresados en unidades arbitrarias en todos los casos). En cortes de ovario se realizó una inmunohistoquímica (IHC) de caspasa 3 donde se observó una mayor immunoreactividad en células tecales del grupo Trap respecto al grupo C. Conclusión: Estos resultados sugieren que la apoptosis provocada por el bloqueo de VEGF está en parte mediada por el desbalance de proteínas apoptóticas de la vía mitocondrial y por la activación de caspasa 3 lo que lleva a un aumento de la degradadación en nucleosomas del ADN.