La apoptosis folicular ovárica inducida por un inhibidor de VEGF está mediada por caspasa-3

ABRAMOVICH DALHIA; PARBORELL FERNANDA; TESONE MARTA

Bs. As.

Congreso; XX Reunión de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH); 2007

Introducción: VEGF es uno de los principales reguladores involucrados en la angiogénesis ovárica, expresándose junto con su receptor (Flk1) en células de granulosa y tecales. Recientemente demostramos que la administración de un inhibidor de VEGF intrabursa en ovario de rata produce un aumento en la apoptosis de células foliculares, provocando una disminución en el número de folículos periovulatorios y un aumento en el número de folículos atrésicos. Además, se observó una disminución de la relación BCL2/BAX y BCLXL/BCLXs. Objetivos: Dilucidar si la inhibición del VEGF produce cambios en la fragmentación del ADN, en la expresión y clivaje de caspasa 3 y en el área del endotelio vascular. Métodos: Se evaluaron los niveles y localización de la principal caspasa efectora, caspasa 3 y de PARP, sustrato de la caspasa 3 e inhibidor de la DNAsa I. Ratas prepúberes tratadas con eCG fueron inyectadas con un inhibidor de VEGF (Trap: quimera Flt-1/Fc recombinante, 0.5 mg) en un ovario y el  contralateral fue inyectado con vehículo (C). Los ovarios fueron extraídos a las 48 hs. Folículos preovulatorios (>400 mm) aislados por microdisección se utilizaron para Western blot y para medir la fragmentación de ADN (ladder) en geles de agarosa. Sobre cortes histológicos se realizó inmunohistoquímica (IHC) para caspasa 3 y para el marcador de células endoteliales Von Willebrand. Resultados y conclusiones: El grupo Trap mostró un aumento en la fragmentación apoptótica de ADN respecto al grupo C (C: 297.0±4.7; Trap: 429.3±36.6, p<0.05), mayores niveles del fragmento p17 activo de caspasa 3 (C: 0.18± 0.04; Trap: 0.33± 0.08, p<0.05) y una disminución en la proteína PARP  no procesada (C: 0.33±0.04; Trap: 0,15±0.03, p<0.01) (datos expresados en unidades arbitrarias en todos los casos). Se observó además una mayor immunoreactividad de caspasa 3 en células tecales del grupo Trap respecto al grupo C. No se observaron diferencias en el área de células endoteliales entre ambos grupos. Estos resultados sugieren que la apoptosis provocada por el bloqueo de VEGF está en parte mediada por el desbalance de proteínas pro y anti apoptóticas de la vía mitocondrial y por la activación de caspasa 3 lo que lleva a un aumento de la degradación en nucleosomas del ADN. Concluimos que VEGF tendría un rol intraovárico autócrino mediado por su receptor sobre la supervivencia de las células de granulosa.