Análisis transcriptómico sobre interacciones entre cepas degradadoras de PAH en un cultivo mixto

ESTEBAN NIETO*(1), SABRINA FESTA(1),MARIANELA MACCHI(1), IRMA MORELLI (1,2), BIBIANA COPPOTELLI (1

Mar del Plata

Congreso; CAMAYA 2018; 2018

AAM

El ensamblaje de dos genotiposmicrobianos puede mostrar dinámicas complejas, que podrían noser observables en cultivos puros, develando funcionalidades y comportamientos de los mismos extrapolablesa nivel comunitario.El objetivo de este trabajo es evaluar las interacciones que se establecenentre dos cepas degradadoras de fenantreno y cómo las mismas afectansudegradación. Se preparó un co-cultivo de dos cepas degradadoras defenantreno, Sphingobium sp. AM y Burkholderia sp. Bk, aisladas de unconsorcio natural degradador de PAH, en una proporción 65:35 debido a que en elconsorcio natural la abundancia relativa de la cepa AM fue mayor. A partir de esteco-cultivo,en medio mineral líquido (MML) con 200 ppm de fenantreno como únicafuente de carbono y energía, se determinaronen el tiempo la cinética dedegradación del fenantreno y la producción de ácido 1-hidroxi 2-naftoico (AHN)(HPLC-UV) y la estructura del cultivo mixto (recuentos en placa R2A) y se analizóla expresión de genes catabólicosde la cepa AM con primers específicos dirigidosa genes quecodifican enzimas dioxigenasasde la vía alta (ahdA1c,ahdA1f, ahdB, ahdC) y baja (ahdA1d, ahdA3, xylE) de degradación defenantreno (RT-qPCR) (2, 8 y 72 hs). Los datos se analizaron mediante el métodode ΔΔCt (gen de referencia: gen ribosomal 16S). Como condición de referencia seutilizó las 2 hs de incubación. Ya al día 4 el cultivo mixto mostró unadegradación del 89%, valor intermedio entre los obtenidos en la cepa AM (75%) yen la cepa Bk (92%) en cultivos puros.Se observó una acumulación de AHN entrelos días 2 y 4, mientras que este intermediario ya no se detectó a partir deldía 7. Al estudiar la estructura se observó unamayor proporción de la cepa AM durantelos primeros 4 días mientras que a partir del día 7 esta relación se invirtió manteniéndosehasta el final del ensayo. En el análisis por RT-qPCR, en el cultivomixto se encontró sub-expresión de los genes adhC a las 8 hs de incubación y de los genes ahdA1f, adhA1d y xylE a las 72 hs, con respecto alcultivo puro. Según se desprende de los recuentos ylos ensayos de RT-qPCR,estos resultados estarían indicando que ambascepas se complementan en la degradación de fenantreno;la cepa AM lo atacaría inicialmente,perotendría un menor protagonismo en la degradación de compuestos intermediarios dela vía baja, donde intervendría la cepa Bk.