Identificação de carnívoros neotropicais por códigos de barra de DNA: desenvolvimento e teste de marcadores

CHAVES, PAULO; GRAEFF, VANESSA; OLIVEIRA, LARISSA; DE ANGELO, CARLOS; HAAG, TAIANA; EIZIRIK, EDUARDO

Gramado, RS, Brasil

Congreso; I Congreso Sudamericano de Mastozoología; 2006

Cerca de 40 espécies de carnívoros terrestres ocorrem na região Neotropical. Várias estão ameaçadas pelo tráfico internacional, caça e atropelamentos. Algumas são raras e difíceis de amostrar para estudos genéticos e ecológicos. Identificar corretamente carcaças atropeladas, material confiscado e amostras não-invasivas com seqüências de DNA pode representar uma valiosa ferramenta em estudos futuros. Parte do gene mitocondrial COI (~650 pb), o código de barra molecular sugerido para metazoários, foi seqüenciada para Arctocephalus australis (n=4), Chrysocyon brachyurus (n=3), Cerdocyon thous (n=5), Lycalopex gymnocercus (n=2), Leopardus geoffroyi (n=2), Panthera onca (n=6) e Lontra longicaudis (n=1), e analisada em conjunto com seqüências de outras espécies disponíveis no GenBank. Como o COI está contido em uma inserção nuclear em Panthera, foi desenvolvido um teste independente utilizando 119 pb do gene mitocondrial ATP6, para identificar se amostras desconhecidas (fezes e pêlos) eram de onça-pintada (Panthera onca) ou puma (Puma concolor). Reconstruções filogenéticas usando COI posicionaram todas as espécies, exceto onça-pintada, no clado esperado. Três amostras de onça-pintada agruparam dentro do clado da inserção nuclear de Panthera tigris, prejudicando sua identificação. Um DNA fecal de onça-pintada que agrupou corretamente no clado de P. onca indica que a redução da quantidade de DNA na PCR pode melhorar a eficácia da amplificação da seqüencia alvo (COI), devido ao maior número de cópias do mtDNA em uma célula em relação ao DNA nuclear. Os resultados mantiveram-se mesmo quando o segmento foi reduzido para 300 pb, sugerindo que amostras subótimas podem ser amplificadas com primers internos. O segmento alternativo do ATP6 foi analisado em 10 amostras conhecidas de onça-pintada (seis fecais, duas de pêlos, uma de pele e quatro de sangue), uma de puma (sangue) e quatro fezes desconhecidas e identificadas como de “felino grande”. Todas as amostras de onça-pintada formaram um clado, enquanto a de puma formou um outro agrupamento com as amostras desconhecidas, indicando que estas são de P. concolor. Concluímos que, embora mais espécies devam ser analizadas, a identificação de carnívoros neotropicais usando os códigos de barra de mtDNA é viável, mesmo em amostras não-invasivas, mas dependerá de de ajustes em relação ao segmento padrão COI.