Regulación por ATP de las vías de señalización MAPKs y PI3K/Akt en células tumorales mamarias MCF-7

SCODELARO BILBAO, PAOLA GABRIELA; BOLAND, RICARDO; SANTILLÁN, GRACIELA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El ATP extracelular regula la proliferación y apoptosis de células tumorales. Previamente, establecimos que el ATP incrementa la concentración de calcio intracelular y la fosforilación de las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPKs) en la línea celular de cáncer de mama humano MCF-7. También demostramos que PKC y la liberación de Ca2+ de depósitos intracelulares participan en la fosforilación de MAPKs por ATP. Además, el ATP estimula la fosforilación de la serina treonina quinasa Akt en forma dependiente de fosfatidil inositol 3 quinasa (PI3K) y Src. En este trabajo investigamos como se relacionan las vías de señalización PI3K­/Akt y MAPKs reguladas por ATP en células MCF-7. Estudios de Western blot mostraron que la inhibición de la expresión de Src mediante la transfección de las células con oligonucleótidos antisentido disminuye la fosforilación de Akt inducida por ATP pero no la de MAPKs. Sin embargo al igual que las MAPKs, la incubación de las células en un medio libre de Ca2+ (+EGTA 0,5 mM) no modificó el efecto del ATP sobre la fosforilación de Src y Akt. El uso de Ly 294002, inhibidor de PI3K, mostró que la fosforilación de ERK1/2, p38 y p46 JNK en respuesta al ATP es independiente de PI3K. En cambio, mediante la utilización del inhibidor Ro318220, PKC fue involucrada en la estimulación de la fosforilación de Akt por ATP. Mediante inmunocitoquímica se observó la translocación de Akt desde el citoplasma hacia el núcleo luego del tratamiento de las células con ATP. Por RT-PCR se evidenció la expresión de receptores purinérgicos del subtipo P2Y2. Estos resultados sugieren que la estimulación de receptores P2Y2 por ATP induce, a través de PKC, la activación de las vías de señalización MAPKs y PI3K/Akt en células MCF-7. Sin embargo, a diferencia de Akt, la regulación purinérgica de MAPKs es independiente de Src y PI3K.