Desarrollo experimental de alternativas terapéuticas y/o preventivas para el Sindrome Urémico Hemolítico (SUH)

BENTANCOR, LETICIA; BILEN, MARCOS; CAMERANO, GABRIELA VERÓNICA; RAMOS, MARÍA VICTORIA; FERNÁNDEZ, GABRIELA; GHIRINGHELLI, DANIEL; PALERMO, MARINA

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; XLIX Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI) - SAFE - SAB - SAN - SAF - SAB; 2004

La infección con E.coli productoras de toxina Shiga (Stx) causa colitis hemorrágica y en lactantes puede complicarse en la forma de síndrome urémico hemolítico (SUH). Debido a que el 30% queda con secuelas neurológicas y/o falla renal, constituye un serio problema de salud pública. A la fecha no existen tratamientos específicos ni vacunas. El objetivo de este trabajo es obtener un inmunógeno genético capaz de expresar una proteína derivada de la toxina shiga, no tóxica, que induzca una respuesta humoral con actividad neutralizante para Stx2. Construcciones plasmídicas: la secuencia de la Stx2 sin el sitio activo (Stx2 deltaAB) fue clonada en un vector procariota (pGEMT), para producción de la proteína y la misma en un vector eucariota (pcDNA3.1) para ensayos de transfección (en células COS 7 con lipofectina) e inmunización de ratones Balb/c. La expresión en células eucariotas y en células procariotas dió el mismo patrón de bandas en WB. La proteína no resultó tóxica sobre células Vero y el plásmido no indujo en los ratones efectos tóxicos específicos a largo plazo (2,4 y 6 meses). Ratones Balb/c adultos, fueron inmunizados i.m. con 50 µg del plásmido los días 0 y 14. Otro grupo fue inoculado tres días antes con el plásmido codificando para el GM-CSF. Los animales fueron sangrados a los 15, 30, 45 y 60 dpi. Se determinó la presencia de anticuerpos anti-Stx2 por WB. Estos sueros fueron luego evaluados en su actividad neutralizante de la Stx2 sobre células Vero. Encontramos que la coinyección con pGM-CSF induce un aumento en los anticuerpos anti-Stx2 y en la actividad neutralizante de Stx2. Estos resultados sugieren que es posible generar anticuerpos con fines terapéuticos con el fin de neutralizar la actividad de la toxina en los niños con diarrea sanguinolenta antes que derive en el desarrollo del SUH.