Screening de proteínas asociadas a la adhesión intestinal en cepas con potencial probiótico para aves de corral

ARGAÑARAZ MARTINEZ E.; BABOT J.D.; ISA O.; GRANDE S.; SILVA C.; PEREZ CHAIA A.

San Miguel de Tucumán

Jornada; III Jornadas de Microbiología sobre Temáticas Específicas del NOA; 2019

Durante los últimos años la demanda mundial de carne aviar aumentó exponencialmente. Esto ha incidido positivamente en la avicultura argentina, generando un aumento en la explotación y en la búsqueda del desarrollo de tecnologías para mejorar la producción y la sanidad animal. En este sentido, microorganismos benéficos aislados de aves de corral han demostrado potenciar la producción y prevenir de infecciones por patógenos. Muchas propiedades funcionales de los probióticos se asocian a características químicas y estructurales presentes en la superficie celular bacteriana (polisacáridos, ácidos teicoicos, proteínas), las cuales deben ser conservadas durante el proceso de industrialización. Por lo tanto, decidimos en esta oportunidad evaluar la presencia de las posibles proteínas (Prot) unidas no covalentemente a la pared celular, implicadas en la adhesión a células epiteliales intestinales (CEI) como propiedad funcional. Lactobacillus salivarius LET201, Enterococcus faecium LET301, Bifidobacterium animalis subsp. lactis LET401 y Propionibacterium acidipropionici LET103 se activaron en MRS, MRScys0.05% y LAPTg, respectivamente en condiciones de microaerofilia a 37 °C. Cultivos activos se lavaron y resuspendieron en 1 mL de LiCl 5M por 1 h a 37°C para desprender las Prot; seguidamente se centrifugó y el sobrenadante (SbLiCl) de cada cepa fue dializado a 4 °C por 48h. A las células tratadas con LiCl (Ttd) y sus controles (Con) se les realizó recuento de células viables y se prepararon para la adhesión a CEI en condiciones de microaerofilia a 41 °C 1h. Mediante SDS-PAGE se estableció el perfil proteico de Con, Ttd y SbLiCl, para lo cual Con y Ttd fueron sometidas a disrupción mecánica, para la obtención del extracto celular. El programa GelAnalyzer permitió analizar las bandas diferenciales (SbLiCl) y aproximar su PM. Mediante análisis in silico (UniProt) de las especies se postula a las posibles Prot involucradas en la adhesión. Los resultados evidenciaron que las Ttd redujeron significativamente (p≤0.05) su capacidad de adherirse, al igual que su viabilidad luego del tratamiento. Por SDS-PAGE se pudo observar Prot de variado PM en los SBLiCl de cada una de las cepas. En el caso de L. salivarius LET201, presentó de acuerdo al análisis in silico posibles Prot de unión a mucus (151 KDa), colágeno (96, 66 KDa) y Lpxtg de pared (110KDa). Enteroccocus faecium LET301, mostró bandas coincidentes a Prot de unión a colágeno (92 KDa), adhesión a lipoproteina (35- 27 KDa) y Lpxtg de pared (58KDa). B. animalis subsp. lactis LET401 reveló también posibles Prot de unión a colágeno (97 KDa) y adhesión a mucus (28, 63KDa), al igual que Propionibacterium acidipropionici LET103 (48, 70 KDa). Estos estudios permitieron observar la contribución de Prot en la interacción con CEI, siendo también importantes para la viabilidad celular. El análisis in silico permitió establecer las posibles Prot presentes en el SBnLiCl. Este es el punto de partida para su purificación y secuenciación en próximos estudios. Todo esto sienta las bases para la conservación de estas moléculas durante los procesos de escalamiento industrial de probióticos, lo que hace de este trabajo un gran aporte al desarrollo de tecnologías de importancia para la industria avícola.