ANÁLISIS DEL ARN MENSAJERO DEL ACTIVADOR DE PLASMINÓGENO Y SU RECEPTOR EN OVOCITOS Y CÉLULAS DEL CÚMULO BOVINAS Y PORCINAS

D.C. GARCIA; M., ROLDÁN OLARTE; G., RIZO; M., JIMÉNEZ DÍAZ; D.C., MICELI

Córdoba

Simposio; 9° Simposio Internacional de Reproducción Animal IRAC; 2011

IRAC

Los activadores de plasminógeno son serinoproteasas secretadas en diferentes tipos celulares que tienen la función de convertir el plasminógeno en una enzima activa, plasmina. Uno de ellos, el activador de plasminógeno tipo uroquinasa (u-PA) puede unirse a su receptor (u-PAR) localizando su actividad proteolítica en la proximidad de la célula; remodelando su matriz extracelular y activando importantes vías de señalización. En nuestro laboratorio se demostró que los ovocitos bovinos y porcinos presentan plasminógeno en la membrana plasmática y zona pelúcida. Por otro lado, existen evidencias que indican que el complejo cúmulo ovocito (COC) bovino tiene actividad de activadores de plasminógeno que permitiría la generación de plasmina en la superficie del ovocito. Además se estudió que en COCs bovinos los niveles de ARNm de u-PA varían durante la maduración in vitro. Sin embargo no se ha estudiado si el aporte de u-PA se debe a la síntesis en el ovocito, en células del cúmulo o en ambos tipos celulares. La expresión de u-PAR todavía no fue analizada en COCs bovinos ni porcinos. Por ello, el objetivo del presente trabajo fue estudiar la expresión del gen de u-PA y su receptor, en ovocitos inmaduros desnudos y en sus células del cúmulo de ambas especies. Se recolectaron ovarios de vacas y cerdas faenadas en frigoríficos locales y se obtuvieron los ovocitos por punción/aspiración de los folículos ováricos (2-8 mm diámetro). Los fluidos foliculares conteniendo los COCs, se transfirieron a cajas de Petri y luego se trataron con hialuronidasa a 37° C para desnudar los ovocitos. Se realizó una extracción de ARN total empleando Tri Reagent como solución de lisis para estudiar por separado los ovocitos y las células del cúmulo de cada especie. Mediante RT-PCR semicuantitativa se analizó la expresión de los genes que codifican para u-PA y u-PAR. Los fragmentos de amplificación se separaron en geles de agarosa al 1,5% teñidos con Sybr Safe y se observaron con un transiluminador de luz visible. Los niveles de expresión se establecieron en relación al gen de β-actina, empleado como control. Los resultados obtenidos indican que u-PAR se expresa tanto en el ovocito desnudo como en las células del cúmulo. Con respecto al gen de u-PA no se detecta, mediante esta técnica, en los ovocitos inmaduros desnudos, mientras que en las células del cúmulo la expresión es débil, en ambas especies. La ausencia de u-PA y la presencia de u-PAR en el ovocito sugieren que u-PA proveniente de otros tipos celulares, como del ovario, previo al proceso de maduración y del oviducto luego de la ovulación, se uniría a su receptor permitiendo la activación del plasminógeno localizado en la superficie del ovocito. Además la unión u-PA/u-PAR podría estar involucrada en la transducción de señales intracelulares en el ovocito y en las células del cúmulo, tanto en bovinos como en porcinos.