Caracterización funcional de las mucinas TcSMUG de Trypanosoma cruzi

MARIA DE LOS MILAGROS CAMARA; DEBORA PASSOS DE MATOS ; MARCELO SALABATER; FERNANDO GENTA; PATRICIA AZAMBUJA; CARLOS A BUSCAGLIA

Santiago de Chile

Congreso; XXIV CONGRESO LATINOAMERICANO DE PARASITOLOGÍA (FLAP XXIV); 2017

Sociedad Chilena de Parasitologia

T. cruzi, el agente etiológico de la enfermedad de Chagas se encuentra recubierto de una densa capa de glicoconjugados entre los cuales se encuentran las mucinas. La familia de mucinas TcSMUG, se expresa durante el estadio de epimastigote presente en el insecto vector y se encuentra subidivido en las subfamilias TcSMUGL y TcSMUGS que presentan distintos patrones de expresión y propiedades bioquímicas. El objetivo principal del presente trabajo fue la caracterización funcional de las mucinas de la familia TcSMUGL en la infección del hospedador invertebrado. Comenzamos con un análisis de la expresión de TcSMUGL en cepas representativas de los distintos linajes de T. cruzi por ensayos de Western Blot y PCR en tiempo real. Detectamos niveles muy variables de expresión entre las distintas cepas analizadas. Escogimos la cepa CL Brener (altos niveles de TcMUGL) y la cepa Y (bajos niveles de TcSMUGL) para la caracterización funcional de la familia TcSMUGL por las diferencias observadas en sus patrones de expresión de TcSMUGL; por otra parte la cepa Y es incapaz de infectar R. prolixus, ya que es rápidamente lisada al ingresar al estómago del insecto. Generamos parásitos transgénicos sobreexpresantes de TcSMUGL, TcSMUGS y TcTSSA (mucina del estadio de tripomastigote) en ambas cepas seleccionadas que fueron utilizadas para realizar ensayos de infección in vivo en ninfas de 5 estadio de R. prolixus. En la cepa CL Brener observamos que la sobreexpresión de TcSMUGL y TcSMUGS aumenta los niveles de infección en R. prolixus. Para la cepa Y observamos que las lineas TcSMUGL y TcSMUGS fueron capaces de establecer la infección en el insecto vector, no lográndose la misma en la cepa salvaje y en la línea TcTSSA. Posteriormente realizamos ensayos de adhesión in vitro al epitelio intestinal y al epitelio del recto de ninfas de 5 estadio de R. prolixus y T. infestans. Para ambas cepas observamos que la sobreexpresión de TcSMUGL aumenta los niveles de adhesión del parasito al epitelio intestinal mientras que la sobreexpresión de TcSMUGS aumenta los niveles de adhesión al epitelio del recto. Finalmente realizamos ensayos de lisis in vitro con contenidos digestivos de ambas cepas de insectos observando un rol de proteccion de ambas mucinas. En conclusión la familia de mucinas TcSMUG estaría cumpliendo un rol fundamental en la infección de T. cruzi en el insecto vector, protegiendo al parasito y mediando la adhesión del mismo al epitelio intestinal y del recto, procesos claves para establecer la infección y transmitir la enfermedad.