Mecanismo de inducción de apoptosis celular mediada por la proteína E2 de HPV: interacción directa con p53 humana

FASSOLARI MARISOL ; DE PRAT GAY GONZALO

Congreso; SAB XL 2011. Sociedad Argentina de Biofisica.; 2011

 Más de 50 tipos de papilomavirus humanos (HPV) infectan células epiteliales y pueden inducir lesiones líticas, crónicas o aquellas que dan lugar a transformación celular. La expresión de todos los genes virales se encuentra regulada por el dominio c-terminal de la proteína E2 (E2C). Otro proceso importante en el cual interviene E2C es en la inducción de la apoptosis celular. Se han establecido dos mecanismos mediante los cuales E2C induce apoptosis celular: un mecanismo indirecto, dependiente del genoma viral, y un mecanismo directo, independiente del genoma viral y via la interacción directa con p53. El objetivo de e ste trabajo consiste en entender la naturaleza de la interacción entre E2C y p53, a través de la caracterización detallada del complejo formado. La proteína supresora de tumores p53 está constituída por cuatro dominios: el N-terminal, el de unión a ADN, el de tetramerización y el C-terminal. El dominio de unión a ADN y la proteína entera fueron expresados y purificados con un alto grado de pureza. Luego se estudió la interacción con E2C mediante las técnicas de retardo en gel, filtración en tamiz molecular, dispersión de luz dinámica, Dicroismo Circular, fluorescencia y calorimetría. Por ninguna de las técnicas mencionadas anteriormente pudimos evidenciar interacción entre el dominio de unión a ADN de p53 y E2C. Sin embargo, mediante la técnica de retardo en gel observamos la formación de un complejo entre E2C y p53 entera, y por absorbancia a 360nm observamos un mecanismo de agregación asociado a la formación del complejo. La caracterización de la interacción entre E2C y p53, no solo tiene implicancia básica, sino que contribuye al conocimiento para el desarrollo de terapias apoptoticas específicas para células infectadas por HPV 1.