Desarrollo de un kit para la detección de presencia de microcistinas in situ

ALBA POSSE, JORGE EZEQUIEL; GONZALEZ, CAROLINA; NADRA, ALEJANDRO D; GASULLA, JAVIER

Salto Grande, Entre Ríos

Taller; VIII TALLER DE CIANOBACTERIAS TOXÍGENAS EN ARGENTINA; 2019

Fundación para Investigaciones Biológicas Aplicadas

Másdel 90% de los episodios de florecimientos de cianobacterias denuestro país reportaron la presencia de microcistinas, un grupo decianotoxinas hepatotóxicas y carcinogénicas. Dada su elevadatoxicidad, se fijó un nivel máximo guía para aguas 1 μg/L.Existen diversos métodos para su detección y cuantificación.Sin embargo, tienen alto costo y requieren remitir las muestras alaboratorios especializados, dificultando el monitoreo frecuente delos cuerpos de agua afectados con cianobacterias. El objetivo esdesarrollar un kit colorimétrico para la detección de microcistinasque sea económico y de uso sencillo, que permita realizar medicionesdirectamente en el sitio de muestreo, sin la necesidad de contar conequipamiento ni personal especializado.Paraesto, se expresó de forma recombinante en Escherichiacoli la subunidadcatalítica de la protein fosfatasa 1 (PP1), la cual es inhibidaespecíficamente por microcistinas. Luego, se purificó la PP1mediante columna de afinidad y posterior diálisis. Su actividadfue evaluada mediante la conversión de un sustrato incoloro,p-nitrofenil fosfato (incoloro), en p-nitrofenol (amarillo).En ensayos realizados enmicroplacas frente a Microcistina-LR (MC-LR) se obtuvo una inhibicióndel 50% (CI50) en el rango de 1 - 5 μg/L MC-LR. Estos resultadosindican que es posible utilizar este sistema como base para producirun biosensor de microcistinas con la sensibilidad necesaria paradetectar la presencia de 1μg/L en agua.Actualmentese está trabajando en la optimización de las condiciones deexpresión y almacenamiento de la proteína, y en la caracterizacióndel ensayo colorimétrico. Luego, se inmovilizará la PP1 en unsoporte sólido (celulosa, alginato, etc) y se pondrá a punto undispositivo sencillo para la detección de microcistinas insitu, queposteriormente será validado con muestras de campo.p { margin-bottom: 0.25cm; line-height: 115%; text-align: justify }a:link { so-language: zxx }