Enantioseparación de fármacos básicos mediante HPLC utilizando una columna comercial Chiralpak IG. Estudio de las condiciones que afectan la enantioselectividad

DÍAZ MERINO, MATÍAS E.; PADRO JUAN MANUEL; CASTELLS, CECILIA B.

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; 10mo. Congreso Argentino de Química Analítica, Santa Rosa, La Pampa; 2019

Asocación Argentina de Químicos Analíticos

La separación de enantiómeros requiere de estrategias analíticas eficientes para su enantiorresolución. La introducción de fases estacionarias quirales (FEQs) en cromatografía como en técnicas electroseparativas, es ventajosa por ser directa y no requerir reactivos adicionales. Por otro lado, las enantiorresoluciones en condiciones de fase inversa (RPLC) o modo polar orgánico (PO), casi sin excepción, son menores en comparación con el modo en fase normal, dada la naturaleza polar de los eluyentes usados que enmascaran las sutiles diferencias en las interacciones de cada enantiómero con el selector quiral. Sin embargo, RPLC o PO tienen muchas ventajas sobre la cromatografía en fase normal: son significativamente más simples y robustas, solutos polares (como fármacos) son mucho más solubles en la fase móvil, menores costos de solventes, ambientalmente más aceptables y compatibles en la interfase con espectrometría de masas 1, 2. Los efectos del eluyente (tipo y cantidad de modificador orgánico, buffer, aditivo y pH) y de la temperatura son importantes para comprender el comportamiento cromatográfico de un analito en una determinada FEQ. En este trabajo nos propusimos estudiar las variables experimentales influyentes sobre la enantiorresolución (Rs) de una amplia familia de agentes betabloqueantes (β- blockers) en modo RPLC y PO sobre una reciente FEQ de tris-(3-cloro-5-metilfenilcarbamato) de amilosa inmovilizada sobre sílice, comercializada como CHIRALPAK IG. Se ensayaron mezclas hidro-orgánicas de diferente composición de metanol (MeOH) o acetonitrilo (ACN) con buffer borato o solución de NaHCO3 20 mM con pHs de 8,26 y 9,07, manteniendo constante la polaridad de las mezclas cromatográficas en RPLC (P´) y fases móviles de metanol (MeOH) con el agregado de aditivos básicos tales como: dietilamina (DEA), etilendiamina (EDA), monoetanolamina (MEA) y trietilamina (TEA), con composiciones de 0,1 y 0,2 %v/v en modo PO. Adicionalmente, se estudió la influencia de la temperatura de la columna (entre 5 a 35 ºC) sobre la separación. En términos generales se observó que a mayores composiciones de solvente orgánico, se logra mayor Rs con MeOH frente a ACN (manteniendo fijo pH y tipo de buffer). También se observó mayores Rs a pH=9,07 (manteniendo fijo el modificador orgánico y el tipo de buffer), e incluso se consiguieron Rs mayores cuando se utilizó NaHCO3, independientemente del tipo de modificador orgánico o pH. Respecto al modo PO se logró observar que utilizando un pequeño agregado de aditivo DEA se pueden obtener mayores valores de enantioselectividad frente al resto de los aditivos básicos, no encontrándose diferencias significativas al aumentar la cantidad del mismo. 1 Lubomirsky E, Padró JM, Di Loreto H, Castells CB, Electrophoresis, 38 (2017) 1948-1955. 2 Padró, JM, Keunchkarian, S, Microchem. J., 140 (2018) 142-157.