Enantioseparación mediante HPLC de a-aminoácidos N-protegidos. Optimización de la resolución mediante columnas acopladas

KEUNCHKARIAN, SONIA; PADRÓ, JUAN M.; CASTELLS, CECILIA B.

Bahía Blanca, Argentina

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica, Universidad Nacional del Sur.; 2009

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Un gran número de sustancias químicas de interés en diversas áreas (industria farmacéutica, agroquímica, petroquímica y alimenticia, así como en síntesis y biología) son ópticamente activas. Actualmente es bien sabido que mientras uno de los enantiómeros es el responsable de la actividad de interés, el otro podría inclusive tener efectos tóxicos. La separación de estos enantiómeros requiere de estrategias analíticas que involucren reacciones químicas con reactivos ópticamente puros para formar diasterómeros o bien de sistemas separativos capaces de formar complejos transientes con ambos enantiómeros del racemato con diferentes constantes de asociación [1]. Muchos de los métodos de separación quiral más eficientes están basados en técnicas cromatográficas. Entre ellos la introducción de fases estacionarias quirales (FEQs) en cromatografía, tanto líquida como gaseosa, es ventajosa por ser directa, no requerir reactivos adicionales ni la inversión de la reacción de derivatización y/o formación del compuesto diasterómero luego de la separación. Si bien el número de FEQs desarrolladas hasta el momento es importante, permanentemente se están buscando sustancias quirales capaces de mejorar las propiedades cromatográficas de las ya existentes. El objetivo del presente trabajo es la resolución de los isómeros ópticos de aminoácidos naturales, previamente derivatizados con un cromóforo (reactivo de Sanger: 2,4-dinitrofluorbenceno) mediante HPLC con detección UV. Para ello se sintetizó en nuestro laboratorio una FEQ tipo “Pirkle” fijando un selector quiral, el alcaloide natural quinina, a un soporte silíceo modificado [2]. Se estudió cromatográficamente la FEQ así obtenida rellenando una columna de cromatografía líquida a alta presión y evaluando su capacidad de enantioreconocimiento y las variables cromatográficas que afectan la retención y selectividad: naturaleza y porcentaje de solvente orgánico, pH de la fase móvil y temperatura. Por último, se separaron mezclas medianamente complejas de aminoácidos mediante un sistema bidimensional consistente en columnas acopladas bajo la modalidad de “heart-cut” heteromodal [3]. En la primera de las columnas (con fase estacionaria no quiral) se separararon los analitos entre sí y en la segunda (con fase estacionaria quiral) lo hicieron los respectivos enantiómeros. [1] Subramanian, G., ed. A Practical Approach to Chiral Separations by Liquid Chromatography, 1994, VCH: New York. [2] Veigl, E., Lindner, W., J. Chromatogr. A, 660 (1994) 255 [3] Mondello, L.; Lewis, A. C.; Bartle, K. D., Multidimensional Chromatography. Wiley & Sons: 2002.