Bromocriptina induce un mecanismo de muerte celular independiente de caspasa 3, participaci¨®n de PKC delta y P38MAPK¡±

CM PALMERI; JP PETITI; S GUTIÉRREZ; LV SOSA; AL DE PAUL; AI TORRES

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC); 2007

Bromocriptina (BC) induce diferentes tipos de muerte celular en modelos proliferativos de células lactotropas. En estudios previos observamos un patrón predominante de "célula negra" en el que intervendrían PKCdelta y p38 MAPK. En el presente trabajo se caracterizárom este tipo de muerte celular diferenciándolo de otros mecanismos y se evaluó la localización subcelular de las quinasas mencionadas. Ratas macho fueron tratadas con cápsulas subcutáneas de benzoato de estradiol (15 mg) durante 25d (grupo E) y los últimos 5d con BC (0,3mg/100g/d)(grupo E+B). Grupo control sin tratamiento (C). La caracterización y cuantificación de la muerte celular se realizó por microscopía electrónica. Se evaluó la expresión de marcadores de apoptosis, caspasa 3 y citocromo c, por Western Blot en homogenatos hipofisarios y la fragmentación del ADN por electroforesis. La localización ultraestructural de PKCdelta y p38 MAPK fosforilada (P-p38) se estudió mediante inmunocitoquímica. Análisis estadístico: ANOVA-Tukey. BC indujo un patrón de muerte caracterizado por la condensación nuclear y vacuolización de las organelas citoplasmáticas. El porcentaje de muerte celular en los grupos C, E y E+B fue de 6%, 10% y 24% respectivamente (p<0.001). En E y E+B se observó un aumento de pro-caspasa 3 (32 kDa) no detectándose los fragmentos maduros (17 kDa) en ningún grupo. La expresión de citocromo c no exhibió cambios en los modelos analizados y el ADN no mostró degradación intranucleosomal. En todos los grupos experimentales, PKCdelta y P-p38 fueron observadas en núcleo, citosol, retículo endoplásmico y mitocondrias de células hipofisarias. El estrógeno aumentó la intensidad de la inmunomarcación en estos compartimientos, mientras que BC indujo una mayor translocación a nivel nuclear. Estas nuevas evidencias bioquímicas y ultraestructurales permitirían clasificar el patrón de "célula negra" inducido por BC como otro tipo de muerte celular, denominado paraptosis, en el que PKCdelta y p38 MAPK están involucradas.