EFECTO DEL LPS BACTERIANO SOBRE EL FENOTIPO DE CÉLULAS MUSCULARES LISAS PROSTÁTICAS Y EXPRESIÓN DE MOLÉCULAS DE INMUNIDAD.

LEIMGRUBER, C.; QUINTAR, A; SOSA LDEL, V.; MALDONADO, C. A.

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

Previamente demostramos que las células musculares lisas (CML) prostáticas responden in vivo a infección bacteriana agudacon hipertrofia y expresión de TLR4. Debido a la importanciade la integridad de la capa muscular periacinar en la homeostasis y funcionalidad de la glándula, nuestro objetivo fue estudiar in vitro la respuesta de CML prostáticas a LPS, endotoxina de bacterias Gram negativas. Se realizaron cultivos primarios de células prostáticas de ratas Wistar con medio MCDB 131, específico para células estromales; al 6º día de proliferación, los cultivos fueron tratados con TGFb1 por 3 días para favorecer la diferenciación de las CML; luego se estimularon con LPS en concentraciones de 0.1, 1, 10 o 100 μg/ml durante 24hs. Los cultivos fueron procesados para análisis morfológico por microscopía óptica y electrónica, y para inmunocitoquímica (ICQ) y Western Blot de a-actina de músculo liso y vimentina. Las células controles mostraron una forma poliédrica e inmunoreactividad para a-actina. En respuesta a LPS y en forma dosis dependiente, las células se hicieron más alargadas, con mayor expresión de a-actina y de vimentina (ANOVA p<0,01 vs. control); en correlación, se observó gran desarrollo de organelas de síntesis proteica. Considerando estos hallazgos, se analizó la expresión de moléculas de inmunidad innata. Por ICQ se observó que LPS estimuló la expresión de TLR4 y de IL1b, particularmente a partir de la dosis de 1 μg/ml; por ELISA, se evidenció secreción de TNFa al sobrenadante, que alcanzó el máximo en la dosis más alta de LPS (ANOVA p<0,001vs control). Estas observaciones indican que las CML prostáticas responden a LPS con reorganización del citoesqueleto y activación celular hacia un fenotipo secretorio. La expresión de moléculas de inmunidad innata evidencia que las CML tendrían un rol importante en la defensa de la glándula contra patógenos, que sin embargo podría comprometer la preservación de la estructura acinar.b1 por 3 días para favorecer la diferenciación de las CML; luego se estimularon con LPS en concentraciones de 0.1, 1, 10 o 100 μg/ml durante 24hs. Los cultivos fueron procesados para análisis morfológico por microscopía óptica y electrónica, y para inmunocitoquímica (ICQ) y Western Blot de a-actina de músculo liso y vimentina. Las células controles mostraron una forma poliédrica e inmunoreactividad para a-actina. En respuesta a LPS y en forma dosis dependiente, las células se hicieron más alargadas, con mayor expresión de a-actina y de vimentina (ANOVA p<0,01 vs. control); en correlación, se observó gran desarrollo de organelas de síntesis proteica. Considerando estos hallazgos, se analizó la expresión de moléculas de inmunidad innata. Por ICQ se observó que LPS estimuló la expresión de TLR4 y de IL1b, particularmente a partir de la dosis de 1 μg/ml; por ELISA, se evidenció secreción de TNFa al sobrenadante, que alcanzó el máximo en la dosis más alta de LPS (ANOVA p<0,001vs control). Estas observaciones indican que las CML prostáticas responden a LPS con reorganización del citoesqueleto y activación celular hacia un fenotipo secretorio. La expresión de moléculas de inmunidad innata evidencia que las CML tendrían un rol importante en la defensa de la glándula contra patógenos, que sin embargo podría comprometer la preservación de la estructura acinar.