EVIDENCIAS DEL EFECTO DIRECTO DE LIPOPOLISACARIDO SOBRE CELULAS LACTOTROPAS EN CULTIVO PRIMARIO: PRESENCIA DEL RECEPTOR TLR-4

SABATINO M E; GUTIERREZ, S.; MASCANFRONI, I.; PETITI, J. P.; SOSA LDEL, V.; PELLIZAS,C.; TORRES, A I; DE PAUL, A. L.

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Cl¨ªnica (SAIC).; 2009

Previamente demostramos que lipopolisac¨¢rido (LPS) indujo proliferaci¨®n de lactotropas de hip¨®fisis hiperpl¨¢sicas. En esta investigaci¨®n, se analiz¨® la presencia de su receptor, TLR-4 y la contribuci¨®n de v¨ªa CD14/Akt/ERK1-2/NF-kB en la proliferaci¨®n de lactotropas inducida por LPS. Adenohip¨®fisis de ratas macho adultas tratadas con benzoato de estradiol por 60d fueron extra¨ªdas, cultivadas y las c¨¦lulas tratadas con: LPS (2¦Ìg/ml), E2 (100nM), LPS+E2, por 30min. La expresi¨®n de TLR-4, CD14, p-Akt, p-ERK1/2 fue determinada por western blot (WB) en extractos citos¨®licos (EC); y NF-kB en extractos nucleares (EN) y EC, adem¨¢s de su localizaci¨®n ultraestructural. La presencia TLR-4 y CD14 en lactotropas se evalu¨® por citometr¨ªa de flujo (CF) y por inmunofluorescencia (IF; Microscop¨ªa Confocal). An¨¢lisis estad¨ªstico: ANOVA-Fisher. LPS solo o combinado con E2 aument¨® significativamente la expresi¨®n de TLR-4 y CD14 en EC y activ¨® Akt y ERK1/2. Adem¨¢s LPS increment¨® los niveles de NF-kB en EN respecto a EC indicando su translocaci¨®n al n¨²cleo (p<0.05). El est¨ªmulo con E2 solo, no provoc¨® cambios en la expresi¨®n de NF-kB. Por CF se detect¨® marca positiva para TLR-4 y CD14 en lactotropas controles no permeabilizadas (21% y 73% respectivamente), indicando su localizaci¨®n en membrana plasm¨¢tica. No se detectaron cambios significativos en la expresi¨®n de TLR-4 en la superficie celular luego del tratamiento con LPS; sin embargo hubo un aumento en el n¨²mero de lactotropas positivas para CD14 (17% vs control, p<0.05). La IF confirm¨® la presencia de c¨¦lulas lactotropas positivas para TLR-4 localizado tanto en membrana plasm¨¢tica como citoplasma. Nuestros Resultados demuestran la presencia del receptor de LPS: TLR-4 en membrana plasm¨¢tica de lactotropas. Adem¨¢s, LPS activa la v¨ªa CD14/Akt/ERK1-2 promoviendo la translocaci¨®n nuclear de NF-kB para finalmente inducir proliferaci¨®n de lactotropas. La interacci¨®n LPS-TLR-4 revela la funcionalidad del receptor en c¨¦lulas end¨®crinas.kB en extractos nucleares (EN) y EC, adem¨¢s de su localizaci¨®n ultraestructural. La presencia TLR-4 y CD14 en lactotropas se evalu¨® por citometr¨ªa de flujo (CF) y por inmunofluorescencia (IF; Microscop¨ªa Confocal). An¨¢lisis estad¨ªstico: ANOVA-Fisher. LPS solo o combinado con E2 aument¨® significativamente la expresi¨®n de TLR-4 y CD14 en EC y activ¨® Akt y ERK1/2. Adem¨¢s LPS increment¨® los niveles de NF-kB en EN respecto a EC indicando su translocaci¨®n al n¨²cleo (p<0.05). El est¨ªmulo con E2 solo, no provoc¨® cambios en la expresi¨®n de NF-kB. Por CF se detect¨® marca positiva para TLR-4 y CD14 en lactotropas controles no permeabilizadas (21% y 73% respectivamente), indicando su localizaci¨®n en membrana plasm¨¢tica. No se detectaron cambios significativos en la expresi¨®n de TLR-4 en la superficie celular luego del tratamiento con LPS; sin embargo hubo un aumento en el n¨²mero de lactotropas positivas para CD14 (17% vs control, p<0.05). La IF confirm¨® la presencia de c¨¦lulas lactotropas positivas para TLR-4 localizado tanto en membrana plasm¨¢tica como citoplasma. Nuestros Resultados demuestran la presencia del receptor de LPS: TLR-4 en membrana plasm¨¢tica de lactotropas. Adem¨¢s, LPS activa la v¨ªa CD14/Akt/ERK1-2 promoviendo la translocaci¨®n nuclear de NF-kB para finalmente inducir proliferaci¨®n de lactotropas. La interacci¨®n LPS-TLR-4 revela la funcionalidad del receptor en c¨¦lulas end¨®crinas.