Modulación de los efectos inhibitorios de Octreotida en adenomas somatotropos. Participación de FGFR4 y SHP2

GARCIA-BARBERA, F; PICECH, F; SOSA L DEL V.; MANCINI, C; PEREZ P; CECENARO L; DE BATISTA J; GUTIERREZ, S.; MUKDSI, J. H.; TORRES, A I; PETITI J P

Simposio; SEMCO; 2021

NTRODUCCIÓNEstudios clínicos han demostrado que los adenomas hipofisarios constituyen entre un 10% y 25% de las neoplasias intracraneales. En general los adenomas funcionantes presentan mayores alteraciones genómicas, en especial los somatotropinomas (hipersecretantes de GH), mientras que los tumores no funcionantes son genómicamente más estables . Las opciones terapéuticas para pacientes con acromegalia incluyen la remoción quirúrgica, radiación o tratamiento farmacológico con análogos de somatostatina (SST) como octreotida (OCT), que inhibe la secreción de GH y posee una limitada acción anti-mitogénica. Sin embargo, se ha observado que aproximadamente el 40% de los pacientes con este tipo de tumor no responden al tratamiento con octreotida, tanto en la disminución de los niveles de GH, como en la reducción del tamaño tumoral. La vía de señalización por la cual los análogos de SST, a través de SSTR2 ejercen su acción anti-proliferativa no ha sido completamente esclarecida. Se ha demostrado que un mediador clave en la señal desencadenada por SSTR2 es la fosfatasa SHP2, que interacciona físicamente con el receptor formando el complejo SSTR2-SHP2, necesario para la inhibición de la proliferación, siendo su función en somatotropinomas, aun no completamente dilucidada. . Por el contrario, SHP2 ha sido descrita como la primera fosfatasa con capacidad proto-oncogénica, y se ha demostrado que es fosforilada por el receptor FGFR4. La expresión de FGFR4 ha sido detectada en el 50% de los adenomas somatotropos y hay numerosa evidencia respaldando el papel oncogénico de este receptor. Hipotetizamos que la respuesta inhibitoria a OCT en células tumorales adenohipofisarias sería modulada por el receptor FGFR4 y la fosfatasa SHP2. El objetivo de este trabajo es analizar si los efectos antiproliferativos de OCT están asociados a los niveles de expresión de FGFR4 y SHP2. MATERIALES Y MÉTODOSMuestras humanas: Se analizó la expresión SHP2 y FGFR4 en somatotropinomas (n=6) y en hipófisis no tumoral (n=6) mediante western blot. Los tumores fueron obtenidos mediante cirugía transesfenoidal, previa firma del consentimiento informado por parte de los pacientes (Repis N° 37/2014, Repis N° 3390/2018).Modelo in vitro: Se realizaron cultivos de la línea tumoral hipofisaria somatolactotropa (secretante de GH y PRL) de rata GH3 que fueron estimuladas con OCT (1-1000 nM) por 24-48-72h.Modelo in vivo: Se utilizó un modelo xenograft que consiste en la inyección subcutánea de 1x106 células de paciente con somatotropinoma silente en ratones inmunodeficientes (nude: NIH(S)-nu/un) de 6 semanas de edad (n=8). Los animales fueron divididos aleatoriamente en 2 grupos (n=4 animales por grupo) e inyectados intraperitonealmente (i.p.) de manera diaria con 200 µl de: (1) Control: PBS, (2) OCT: octreotida 50 µg/kg durante 11 días.Western Blot: Se determinarán los niveles de FGFR4 (1:500, Santa Cruz Biotechnology sc-136988), SSTR2 (1:300, Santa Cruz Biotechnology, sc 365502) y SHP2 (1:1000, Santa Cruz Biotechnology sc-7384). Inmunohistoquímica (IHQ): tumores de ratones fueron procesados para IHQ de FGFR4 y SHP2. Para el análisis, de cada muestra se adquirieron 10 imágenes de manera aleatoria usando el microscopio Zeiss Axiostar plus a una magnificación final de 400X. Los niveles de expresión fueron calculados utilizando el score de inmunoreactividad (IRS). Análisis Estadístico: Se realizó un análisis estadístico mediante la prueba ANAVA seguida de la prueba de Fisher mediante el programa InfoStat. Los niveles de significancia se eligieron como P 100nM) por 48 horas disminuyó la expresión proteica total de SHP2. Además, en nuestro modelo in vivo, la exposición con OCT durante 11 días disminuyó significativamente el tamaño tumoral respecto al grupo control, efecto que estuvo asociado a una disminución de los niveles de SHP2. 3.Octreotida incrementó la expresión de FGFR4 en el modelo in vivo. Siguiendo el mismo razonamiento para SHP2, se evaluó la expresión proteica total de FGFR4 por WB e IHQ y se observó que el tratamiento con OCT incrementó significativamente la expresión del receptor FGFR4 con respecto a los ratones controles.CONCLUSIÓNNuestros resultados, utilizando muestras de pacientes y modelos in vitro e in vivo, demuestran que el efecto antiproliferativo de OCT en células tumorales somatotropas sería mediado por SHP2, sugiriendo su rol pro-oncogénico. En forma paralela se estudió los niveles de expresión de FGFR4, molécula previamente caracterizada en adenomas hipofisarios, en un contexto de tratamiento con análogo de SST. Al contrario de lo que sucede con SHP2, los altos niveles de FGFR4 luego del tratamiento con OCT podría estar asociado a un mecanismo molecular de adaptación para contrarrestar el efecto citostático de OCT. Este abordaje integrador al estudio de la respuesta al análogo de somatostatina octreotida, permitirá comprender el comportamiento refractario de los adenomas somatotropos y aportará información para la identificación de nuevos blancos moleculares posibilitando la optimización de los tratamientos farmacológicos actuales.