S100B estimula la migración y proliferación astroglial. Implicancias para su rol como DAMP

SEOANE R; VILLARREAL A; RAMOS AJ

Jornada; Jornadas Cienfiticas AECUBA (Asociacion de estudiantes por la ciencia de la facultad de medicina de la universidad de buenos aires); 2011

S100B es una proteína glial liberada al espacio extracelular luego de una injuria cerebral. Así, S100B se comportaría como indicador de daño tisular o DAMP (Patrón Molecular Asociado al Daño) promoviendo la respuesta inmune innata mediada por la glía. El objetivo de este trabajo fue estudiar si S100B induce hiperplasia y migración glial, soportando así la hipótesis de su rol como DAMP participando en la respuesta de gliosis reactiva. Posteriormente se evaluó si el receptor RAGE es mediador de los efectos de S100B en los astrocitos. Utilizando un modelo de herida artificial (scratch) que genera un área libre de células en cultivos de astrocitos, se estudió la invasión del scratch producida por migración y proliferación, y los efectos de la exposición a S100B. La dependencia de RAGE y de la división celular se determinó utilizando anticuerpos neutralizantes o un inhibidor de la mitosis (5-fluorouracilo, 5FU) respectivamente. Se estudió la incorporación de Bromodeoxiuridina (BrdU) al ADN como medida de proliferación. Imágenes de cultivos procesados por inmunocitoquímica con marcadores específicos (anti-GFAP; anti-S100B; anti-BrdU; tinción nuclear Hoechst) se analizaron mediante el programa NIH ImageJ. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión. Utilizando un modelo de herida artificial (scratch) que genera un área libre de células en cultivos de astrocitos, se estudió la invasión del scratch producida por migración y proliferación, y los efectos de la exposición a S100B. La dependencia de RAGE y de la división celular se determinó utilizando anticuerpos neutralizantes o un inhibidor de la mitosis (5-fluorouracilo, 5FU) respectivamente. Se estudió la incorporación de Bromodeoxiuridina (BrdU) al ADN como medida de proliferación. Imágenes de cultivos procesados por inmunocitoquímica con marcadores específicos (anti-GFAP; anti-S100B; anti-BrdU; tinción nuclear Hoechst) se analizaron mediante el programa NIH ImageJ. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión. Utilizando un modelo de herida artificial (scratch) que genera un área libre de células en cultivos de astrocitos, se estudió la invasión del scratch producida por migración y proliferación, y los efectos de la exposición a S100B. La dependencia de RAGE y de la división celular se determinó utilizando anticuerpos neutralizantes o un inhibidor de la mitosis (5-fluorouracilo, 5FU) respectivamente. Se estudió la incorporación de Bromodeoxiuridina (BrdU) al ADN como medida de proliferación. Imágenes de cultivos procesados por inmunocitoquímica con marcadores específicos (anti-GFAP; anti-S100B; anti-BrdU; tinción nuclear Hoechst) se analizaron mediante el programa NIH ImageJ. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión. La exposición a S100B (50nM-1M) promovió el cierre del scratch. Al bloquear la mitosis, solamente 1M S100B indujo migración al scratch. La incorporación de BrdU resultó aumentada en astrocitos expuestos a S100B. El bloqueo de RAGE demostró que este receptor es necesario para los efectos de S100B. Nuestros resultados soportan la hipótesis de que S100B actúa como DAMP promoviendo la proliferación y migración de los astrocitos hacia una lesión.