Fotomarcación hidrofóbica de la Na+,K+-ATPasa: Interacción con la membrana plasmática

IRENE MANGIALAVORI Y MÓNICA MONTES

Facultad de Farmacia y Bioquímica. UBA

Jornada; •153º Jornada científica de la Academia de Farmacia y Bioquímica; 2009

Academia de Farmacia y Bioquímica.

La bomba Na+, K+ ATPasa genera gradientes electroquímicos de Na+ y K+ a través de la membrana plasmática. Es un hétero-dímero, cuya subunidad α, está formada por 10 segmentos transmembrana y dos grandes loops citoplasmáticos y que constituyen el motivo característico de las P-ATPasas. La subunidad β presenta una hélice transmembrana y un gran dominio extracelular altamente glicosilado. Con el objetivo de obtener información estructural sobre el dominio hidrofóbico de la proteína, utilizamos una técnica de fotomarcación hidrofóbica con un análogo de fosfatidilcolina ([125I] TID-PC/16). Esta estrategia nos permite evaluar la exposición de la región transmembrana a lípidos circundantes. La incorporación específica de  [125I] TID-PC/16,  en membranas enriquecidas y en la proteína extraída en micelas de C12E10, fue un 60% mayor en presencia de K+ que en presencia de Na+. Además, esta relación fue similar en la subunidad β. Nuestros resultados sugieren que en presencia de Na+ la disposición de los segmentos transmembrana es más compacta, mostrando una menor exposición a los lípidos de membrana. Mientras que en presencia de K+, se obtiene una conformación más abierta. Por otra parte, la menor incorporación específica en presencia de Na+ en la subunidad β, podría sugerir una mayor interacción con la subunidad α, que provoque una menor exposición a la membrana plasmática. Con subsidios de CONICET, ANPCYT y UBACYT