Caracterización del efecto de la actina sobre la actividad de la Bomba de Calcio de Membrana Plasmática durante las primeras etapas de polimerización: efecto de la actina-G y oligómeros

MARIANELA DALGHI; MARISA FERNANDEZ; MARIELA FERREIRA-GOMES; IRENE MANGIALAVORI; JUAN PABLO ROSSI

Buenos Aires

Congreso; • XL. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2011

Sociedad de Biofísica Argentina

En nuestro laboratorio se ha demostrado que la actividad de la Bomba de Calcio de Membrana Plasmática (PMCA) puede ser regulada por el citoesqueleto de actina. Dicha regulación estaría dada a través de la interacción directa entre ambas proteínas, como se evidenció a través de resonancia plasmática de superficie (Kd 1,04 ± 0,37 µM)1. Dado que fue previamente observado que la activación máxima de la PMCA es debida a la acción de la actina G y/o cortos oligómeros, se decidió estudiar en detalle la activación durante esta etapa de la polimerización. Nuestros resultados muestran que: (1) La actina es capaz de inducir un cambio conformacional en el dominio transmembrana de la PMCA, tal como fue descripto para otros activadores2, con una Keq  de 1,09 ± 0,07 µM. (2) La actividad Ca2+-ATPasa mostró un aumento de hasta cinco veces con una K0,5 de 1,73 ± 0,06 µM. (3) La cantidad del intermediario fosforilado mostró un aumento de la fosfoenzima con una K0,5 de 1,57 ± 0,05 µM. (4) El efecto activador es dependiente de la [Ca2+]libre, y es mayor a bajas [Ca2+]libre –inferiores a la K0,5 de la bomba por el catión-.  (5) En presencia de calmodulina, la actina provoca una activación de la bomba mayor a la que se obtiene con cada una de ellas por separado. En conclusión, actina G o cortos oligómeros causan la activación Ca2+-ATPasa de la PMCA mediante la interacción directa entre ambas proteínas, Nuestros resultados sugieren además, que este nuevo modulador aumenta la afinidad de la bomba por calcio mediante un mecanismo que involucra un cambio conformacional y modifica la estabilidad de la fosfoenzima.