Complejos estables en la bomba de calcio de membrana plasmática

IRENE MANGIALAVORI; MARIELA FERREIRA-GOMES; JUAN PABLO ROSSI

Buenos Aires

Congreso; • XL. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2011

La bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA) transporta calcio contra gradiente electroquímico desde el citoplasma hacia el exterior celular. Su ciclo de reacción es descripto con el modelo E1-E2 e involucra  intermediarios fosforilados (EP) a partir de ATP.  Nuestro objetivo es estudiar estos intermediarios fosforilados a través de la utilización de inhibidores que “fijen” a la enzima en una conformación análoga1. Nuestros resultados muestran que: (1) El Al3+ inhibe la actividad Ca2+-ATPasa y causa un aumento del 96 ± 9% en el nivel de intermediario fosforilado; (2) El AlF4-; VO3- y el MgF42- inhiben la actividad Ca2+-ATPasa y los dos primeros, disminuyen un 71.5 ± 5% el nivel de intermediario fosforilado; (3) La incorporación específica de [125I]TID-PC/16, una fosfatidilcolina fotoactivable que permite estudiar las interfase lípido-proteína2,3, fue similar en E2 -ausencia de Ca2+-  y en los intermediarios análogos a E2P estudiados. Es posible sugerir que la pérdida de actividad Ca2+-ATPasa en presencia de Al3+ se debe a que éste bloquea la desfosforilación de la enzima produciendo una acumulación del intermediario fosforilado (EP). Mientras que, la pérdida de la actividad por acción de AlF4-; VO3- o MgF42- se debería a que éstos impiden la fosforilación de la PMCA generando una conformación análoga a E2P. Por otra parte, la superficie accesible a los lípidos es similar en E2 y los análogos de E2P estudiados, lo que sugiere que no existen grandes cambios estructurales en el dominio transmembrana de ambos intermediarios.